3-мерная культура клеток карциномы легкого: метод изучения клеточно-матриксных взаимодействий

Аннотация

Источник: Chen, S. et al. Многомерная система кокультуры для моделирования прогрессирования плоскоклеточной карциномы легкого. J. Vis. Exp. (2020).

Это видео описывает технику 3-D культивирования клеток карциномы легких для изучения клеточно-матриксных взаимодействий. В протоколе мы проведем 3D-культивирование клеток карциномы легкого TUM622, чтобы изучить ее потенциал в образовании органоидов in vitro.

Протокол

1. Пассирование и культивирование клеток TUM622 в 2D-культурах

1. Теплая 3D питательная среда и реагенты для диссоциации клеток (см. Таблицу материалов) для клеток TUM622 при 37 °C.
2. Пассаж клеток TUM622 при 80% слиянии в 2D-колбах. Обычно это происходит через 1 неделю после пассирования.
3. Выбросьте старый носитель из колбы T75 и промойте один раз 6 мл буфера HEPES. Избегайте пипетирования непосредственно на клетки.
4. Аспирируйте буфер HEPES. Добавьте 4 мл трипсина/ЭДТА (0,25 мг/мл, см. Таблицу материалов) для быстрого полоскания и выбросьте трипсин/ЭДТА.
5. Добавьте 2 мл трипсина/ЭДТА и инкуб....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Среда для роста бронхиального эпителия	Лонза	СС-3170 БЕГМ
Сетчатый фильтр 40 мкм	ТермоФишер	352340 (Английский	Для прохождения ячеек TUM622
Система CoolRack CFT30	Биоцизия	БКС-138	Для 3D культуры
Радиатор CoolSink XT96F	Биоцизия	БКС-536	Для 3D культуры
Набор для сбора 3D-клеток Cultrex	Био-Техне	3448-020-К
Матригель (предпочтительно для монокультуры)	Корнинг	356231	Для 3D культуры
Lab-Tec II под патрон #1.5 Немецкая система защитных стекол	Нальге Нунк Интернэшнл	155409 (8)	Для 3D культуры
Lab-Tec II под патрон #1.5 Немецкая система защитных стекол	Нальге Нунк Интернэшнл	155379 (2)	Для 3D культуры
Реагенты субкультуры ReagentPack	Лонза	СС-5034	Для диссоциации клеток TUM622

)