Иммунофлуоресцентный анализ: метод идентификации опухолевых клеток, захваченных на медицинской проволоке

Аннотация

Источник: Gallerani, G. et.al., Характеристика опухолевых клеток с использованием медицинской проволоки для захвата циркулирующих опухолевых клеток: 3D-подход на основе иммунофлуоресценции и ДНК FISH. J. VIS. EXP. (2017).

Это видео описывает технику иммунофлуоресцентного окрашивания циркулирующих опухолевых клеток, захваченных на функционализированной медицинской проволоке. Функционализированный провод позволяет изолировать ЦОК in vivo, непосредственно из кровотока пациента.

Протокол

1. Иммуно-ДНК FISH на проводе

1. Шиповка клеточной линии на проводе (поддержка 3D)
   заметка: Предварительная настройка включает в себя точный подбор адгезивных клеточных линий на основе EpCAM-позитивности. Проволока функционализирована антителами против EpCAM таким образом, что окрашиваются только EpCAM-положительные клетки.
   заметка: Не прикасайтесь к функциональной части провода во избежание повреждений.
   заметка: Все действия следует проводить под ламинарным вытяжным колпаком в стерильных условиях.
   1. Ресуспендируйте все содержимое колбы T75 (80% конфлюенция) во ....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
этанол	Карло Эрба	# 414605
Подросток 20	БИО РАД	# 1706531
PBS (фосфатно-солевой буфер)	Медикаго	# 09-9400-100
ацетон	Сигма Олдрич	# 534064-500МЛ
РЕЗИНОЦЕМЕНТ	Королевские таленсы	#95306500
EpCAM-FITC (клон: HEA-125)	Митеньи	#130-080-301
РПМИ 1640	Gibco	# 31870-025
XT ALK BA	Зонды MetaSystems	# D-6001-100-OG
Detektor CANCER01 EpCAM	Гилупи Наномедизин		Функционализированная проволока
Флуоресцентный микроскоп ZEISS Axioskop	ЦЕЙСС
Nikon NIS-Elements BR 4.11.00 64-битное программное обеспечение	Компания Nikon
Nikon DS-QiMc 12-битный цифровой фотоаппарат	Компания Nikon	DS-QiMc