Центрифугирование с градиентом плотности: метод выделения клеток ХЛЛ из периферической крови

Аннотация

Источник: Hay, J. et al. Субклеточное фракционирование клеток первичного хронического лимфоцитарного лейкоза для мониторинга трафика ядерных/цитоплазматических белков. J. vis. Exp. (2019).

Это видео описывает технику выделения клеток хронического лимфоцитарного лейкоза (ХЛЛ) из периферической крови. С помощью этого протокола мы будем выделять клетки ХЛЛ из образца крови пациента для последующей эффективной генерации ядерных и цитоплазматических фракций.

Протокол

1. Выделение клеток ХЛЛ из образцов крови пациента

1. Образцы периферической крови пациентов с ранее полученным согласием на ХЛЛ поступают из клиники в пробирках для сбора крови ЭДТА, сопровождаемые подсчетом лейкоцитов (WCC). Очистите образцы ХЛЛ периферической крови в соответствии с ВСЦ. Для WCC < 40 x 10⁶ клеток/мл перейдите к шагу 1.1.1; для WCC ≥ 40 x 10⁶ клеток/мл перейдите к шагу 1.1.2.
   1. Вылейте содержимое всех пробирок с кровью ЭДТА в коническую центрифужную пробирку объемом 50 мл и добавьте 50 мкл коктейля для обогащения В-клеток человека на 1 мл крови. Инкубировать при комнатной температуре (RT) в течение 20 минут. П....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Тюбик 15 мл	Griener Bio one	188271
Микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл	Griener Bio one	616201
Дмсо	сигма	Д2650
Эдта	сигма	ЭЦП
Фетальная бычья сыворотка	Термофишер	10500064
Среда с градиентом плотности Histopaque1077	сигма	Н8889
Решение Trypan Blue	Термофишер	15250061
Таблетки PBS	Научный центр Фишера	BR0014G
RosetteSep Коктейль для обогащения В-клеток человека	Технологии стволовых клеток	15064
Сигма 3-16П	SciQuip		центрифуга