Все процедуры с участием людей были выполнены в соответствии с институциональными, национальными и международными рекомендациями по благополучию человека и были рассмотрены местным институциональным наблюдательным советом.
1. Аспирация костного мозга и подготовка образцов
- Подготовка пациента и материала
- Наполните один или два шприца объемом 10 мл 1% лидокаином с помощью иглы 16 калибра. Замените иглу на стрелку 21-го калибра.
- Нанесите две капли 5% ЭДТА на часы.
- Установите предметные стекла (n=15 с постоянной нумерацией пациентов и датой) для подготовки мазка.
- Поместите пациента в положение бокового пролежня. Найдите верхний задний подвздошный отросток позвоночника и отметьте его ручкой.
заметка: Как правило, задний верхний подвздошный отросток расположен на одну ширину руки дистальнее гребня подвздошной кости и на одну ширину ладони латерально по отношению к средней линии. У женщин фактический позвоночник может быть немного более боковым, у некоторых мужчин немного более медиальным.
- Продезинфицируйте кожу хлоргексидином 0,5-1% в этаноле от предполагаемой области биопсии наружу кругами.
- Откройте упаковку стерильных перчаток, наденьте стерильные перчатки и положите упаковку на стол, чтобы создать стерильное поле. Откройте упаковку с аспирационной иглой и поместите ее на стерильное поле.
- Проникните в кожу и подкожную клетчатку и, наконец, в надкостницу. В надкостницу ввести лидокаин таким образом, чтобы была обезболена область диаметром 1 см.
заметка: Адекватное введение лидокаина в надкостницу является одним из важнейших факторов комфорта пациента. Проверьте, была ли надлежащая анестезия надкостницы, постучав введенной иглой по предполагаемому месту биопсии и спросите, чувствует ли пациент боль. Примечание: Дети полностью обезболены в течение всей процедуры.
- Держите аспирационную иглу (15 Ga x 2,8 дюйма) проксимальным концом на ладони, а указательный палец прижмите к боковой стороне металлического стержня иглы возле кончика; такое положение обеспечивает лучший контроль.
- Введите иглу вращательным движением (быстро чередуя пронационные/супинирующие движения) через кожу к подвздошному отделу позвоночника и соприкоснитесь с задним подвздошным отделом позвоночника.
- Убедитесь, что игла введена в обезболенную область надкостницы, чтобы пациент чувствовал только давление и никакой боли. Если пациент чувствует боль, либо измените положение иглы, либо введите больше лидокаина.
- Мягко, но сильно надавливая, продвигайте иглу, вращая ее попеременно по часовой стрелке и против часовой стрелки. Вход в полость костного мозга обычно обнаруживается по снижению резистентности.
- Снимите стилет с иглы. Приложите к игле пустой шприц объемом 10 мл.
- Приложите отрицательное давление, аккуратно вытащив поршень шприца. Предупредите пациента о том, что он может испытывать спазматическое ощущение и боль при аспирации костного мозга. Если спикул костного мозга выделяется недостаточно, следует провести еще одну аспирацию с одним быстрым забором. Больше всего спикул будет в первых 1-2 мл, полученных от первоначального вытягивания. Отсаживайте всего 1-2 мл во избежание разбавления образца.
заметка: Разведение приведет к гемодилюции и может исказить результаты МОБ.
- Извлеките шприц и вставьте стилет в аспирационную иглу. Часть костного мозга извергните в часовое стекло, а остальную часть — в пробирку объемом 8 мл, покрытую гепарином.
заметка: Переверните каждую пробирку сразу после введения аспирата костного мозга в пробирку для образцов, чтобы обеспечить адекватное антикоагулянтное действие. Свертываемость костного мозга часто является причиной неподходящего материала. Дополнительный костный мозг может быть аспирирован из того же места, но предпочтительно, чтобы игла продвигалась на 5-10 мм до забора нового аспирата. Желательно брать не более 2 вытягиваний на один уровень введения. Обязательно отметьте трубки возрастающими числами, обозначающими первый, второй и/или последующие розыгрыши. Общепринятым правилом является использование первого отбора для наиболее релевантного диагностического анализа.
- В качестве альтернативы втяните иглу от места введения и снова введите ее в полость костного мозга на расстоянии нескольких миллиметров от первоначального места введения и повторите процедуру.
заметка: Не отсасывайте более 1-2 мл на одну глотку, чтобы избежать значительного загрязнения крови.
- Повторяйте так часто, как это необходимо. Когда аспирируется достаточный материал для протокола конкретного клинического исследования, удалите иглу костного мозга.
заметка: В случае медленной или иным образом затрудненной аспирации костного мозга может быть полезно использование шприцев, предварительно промытых антикоагулянтом. В случае сухого крана проведите биопсию трепана, которая выходит за рамки данной рукописи.
2. Подготовка мазков к морфологическому исследованию
- Для оптимальной морфологической оценки извлеките спикулы (например, с помощью пластикового шпателя) из аспирата в часовом стекле и поместите их на предметное стекло.
- Осторожно поместите еще одно предметное стекло на предметное стекло с костным мозгом и осторожно скользите, избегая любого давления><.
заметка: Только в случае очень больших спикул костного мозга можно оказывать небольшое давление, чтобы уменьшить толщину распространения клеток. Процедура опирается на помощь ассистента, который может работать с пробирками для образцов. Решающее значение имеет точная маркировка трубок с указанием номера пациента и номера последовательного забора костного мозга.
- Тщательно просушите предметное стекло, а затем выполните окрашивание May Giemsa Grünwald (см. таблицу материалов). Изучите под световым микроскопом морфологию (см. рис. 1).
ПРИМЕЧАНИЕ: На рисунке 1А показаны мазки здорового костного мозга, состоящие из различных функциональных типов клеток, в то время как на рисунке 1В изображен пациент с ОМЛ с преобладанием лейкозных бластов. Чтобы лучше определить остаточную лейкемическую нагрузку, необходимо провести иммунофенотипирование.
