В этой статье описывается подход к microdissect данио сетчатки и без пигментного эпителия сетчатки связаны, от одного до трех дней эмбрионы функции организма крыс.
Методическая статья
В этой статье описывается подход к microdissect данио сетчатки и без пигментного эпителия сетчатки связаны, от одного до трех дней эмбрионы функции организма крыс.
Данио рерио является популярная модель животного для исследования на развитие глаза из-за его быстрого
Часть 1: Подготовка перед микродиссекции
Часть 2: Dissection - удаление мозга и глаз выдержка 1
Часть 3А: вскрытие сетчатки 1
Часть 3B: НПП подключением сетчатки рассечение 3
Часть 4: образец ткани коллекции для работы РНК
Представитель Результаты

Рисунок 1. () Боковые и (') спинной зрения данио личиночной головы на 52 HPF до вскрытия. (") Соответствующей гистологической части личиночной головы () & ('). (В) и бокового (В') спинной зрения расчлененные сетчатки на 54 HPF. Поверхности сетчатки цел с обеих боковых и спинной взглядов. (В ") соответствующей гистологической части расчлененного сетчатки (B) и (В '). Структура сетчатки и сетчатки ламинирования был цел. В частности, внеклеточного матрикса между слоем фоторецепторов и НПП (", стрелки) хорошо сохранился в расчлененный сетчатки (В", стрелки). (C) Боковые и (С) медиальные зрения расчлененные РПЭ-прилагается сетчатки на 52 HPF. НПП слой цел и непрерывным, который также обозначается гистологической части расчлененного ткани (C "). Белую область в С" является зрительного нерва (стрелка). Для гистологии, образцы тканей были собраны и зафиксированы в 4% параформальдегида. Пластиковые вложения и секционирования этих образцов были выполнены, как описано 3. Шкала бар = 50 мкм.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Микродиссекция тканей данио глаз может эффективно получить нетронутыми сетчатки и РПЭ-прилагается сетчатки. Это существенно помогает выражение исследований, касающихся конкретных тканей глаза (например, сетчатки или РПЭ). На самом деле, мы успешно использовал эти процедуры, чтобы получить профили РНК выражение целого сетчатки 1 и НПП 3. Полезность этих профилей активно поддерживают наше недавнее определение путей и семейств генов, которые в возмущенной сетчатки дифференциации мутантов 2....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Эта работа поддерживается запуск фонд от Отделения биологических наук Университета Пердью.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Беспроводной привод для пестика | VWR international | 47747-370 | |
| Источник питания постоянного тока | Ласкар | PSU130 | Подойдет любой источник питания постоянного тока. Конкретное напряжение для другого оборудования потребуется дополнительно оптимизировать. |
| Одноразовый пестик &микроцентрифужная пробирка, 1,5 мл (без ДНКаз, РНКаз и пирогенов) | VWR international | 47747-366 | Они используются для сбора тканей в TRIzol для анализа экспрессии. |
| Пинцет Dumont #5, кончики: 0,05 x 0,01 мм, Inox | World Precision Instruments, Inc. | 500341 | Желательно соблюдать заданный размер кончика, однако это требование не является абсолютным, так как может возникнуть необходимость периодически затачивать кончик. |
| Пинцет Dumont #5SF, кончики: 0,025 x 0,005 мм, Inox | Fine Science Tools | 11252-00 | Желательно соблюдать заданный размер кончика, однако это требование не является строгим, так как время от времени может возникнуть необходимость в затачивании кончика. |
| Культуральные планшеты Falcon из полистирола, 60 X 15 мм | BD Biosciences | 351007 | Эти планшеты используются в качестве планшетов для диссекции. |
| Стереомикроскоп Olympus SZX16 | Olympus Corporation | SZX16 | Подойдет любой стереомикроскоп. В предыдущих исследованиях мы использовали стереомикроскоп Leica.1-3 без каких-либо проблем. Кроме того, для диссекции мы используем исключительно объектив 1X, несмотря на установленный объектив 2X. |
| Заточный камень | Fine Science Tools | 29008-01 | Используйте это для заточки кончиков пинцета, если необходимо. |
| Термопластина | Tokai Hit | MATS-U55SZX2B | Это используется для поддержания температуры ткани на протяжении всего процесса диссекции и минимизации влияния температурных колебаний на экспрессию генов. Мы также поместили весь микроскоп в помещение с контролируемыми условиями окружающей среды при температуре 28°C.°С, в ходе диссекции в предыдущих исследованиях1-3 с хорошим результатом. |
| Trizol, 100 мл | Invitrogen | 15596-026 | |
| вольфрамовая проволока, диаметром 0,015 дюйма | World Precision Instruments, Inc. | TGW1510 | |
| Деревянный аппликатор | Пуританин | 807 | Это используется для удерживания химически вытравленной вольфрамовой иглы. |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение