Хронический изображений Мыши зрительной коры Использование тоньше черепа-подготовка

Summary

В этом материале видео и дополнительные, мы показываем протокол для хронических В естественных условиях Визуализации нетронутыми мозга с помощью разбавленной-череп подготовки.

Abstract

В естественных изображений с помощью двух-фотонной микроскопии лазерного сканирования (2PLSM) позволяет изучения живых клеток и нейронов процессов в интактном мозге. Техники, представленные здесь позволяет изображений одного и того же область мозга, в нескольких точках времени (хронический изображений) с микроскопическими разрешение позволяет отслеживания дендритных шипиков, которые являются мелкими структурами, которые представляют большинство возбуждающих постсинаптических сайтов в ЦНС. Способность четко решать штраф корковых структур в течение нескольких моментов времени имеет много преимуществ, в частности, в изучении пластичности мозга, в которых морфологические изменения в синапсах и схема реконструкции может помочь объяснить основные механизмы. В этом материале видео и дополнительные, мы показываем протокол для хронических в естественных изображений нетронутыми мозга с помощью разбавленной-череп подготовки. В разреженных черепа препарата минимально инвазивных подход, который позволяет избежать потенциального повреждения твердой мозговой оболочки и / или коры, снижая тем самым начало воспалительного ответа. При этом протокол выполняется правильно, то можно четко отслеживать изменения в характеристики дендритных позвоночника в интактном мозге в течение длительного периода времени.

Protocol

1. Для визуализации нейронов в интактном мозге при помощи двух-фотонной микроскопии, подготовка которых нейроны помечены флуоресцентными маркерами используется. В экспериментах, представленные здесь мы используем GFP-М трансгенных мышей линии, которая этикетки слой 5 пирамидальные клетки ^1. Уровень 5 пирамидальные клетки проекта дендритные процессы в поверхностных слоях, что позволяет визуализации дендритов и дендритных шипиков на глубину до 300 мкм ниже уровня Пиа. Альтернативный подход заключается в этикетке клеток с использованием вирусных маркеров (см. Лоури и соавт., Представленный на Юпитер).
2. Стерилизовать рабочей области, используя 70% этанола и авт....

Discussion

Хронический визуализации с использованием двухфотонного микроскопии становится все более популярной техникой для изучения морфологических изменений, вызванных в течение ^2-5 пластичности. Здесь мы показываем, в разреженных черепа подготовки следовать определены дендритных шипиков в интактном мозге мышей в разные дни изображений. В этом протоколе черепа остается без изменений, что приводит к минимальным повреждением мозга и приводит к очень низким уровням neuroinflammation которые могут изменить функцию мозга <.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Фентанилцитрат		в доме		Фентаниловый коктейль: обезболивающий коктейль; Доза IP: 0,0125 мл/г Концентрация коктейля: 0,05 мг/кг
медетоминдина гидрохлорида		в собственном фентаниловом		коктейле: обезболивающий коктейль; Доза IP: 0,0125 мл/г Концентрация заключительного коктейля: 0,05 мг/кг
Midazolam HCL		In House		Fentanyl Cocktail: Обезболивающий коктейль; доза <бр/>ИП: 0,0125 мл/г<бр/><бр/>Концентрация конечного коктейля: 0,05 мг/кг
2,2,2-трибром– танол				Авертин Коктейль: Обезболивающее; Доза IP: 0,0075 куб.см/г<бр/><бр/>Концентрация конечного коктейля: 1%
2-метил-2-бутанол (конечная концентрация: 0,775%)				Коктейль авертин: Анестетик; Доза IP: 0,0075 куб.см/г<бр/> Концентрация заключительного коктейля: .775%
TC-1000 Система управления температурой для мышей		CWE, Inc.	TC-1000	Регулирование температуры тела
Toberadex		in House		Глазная мазь
10% хлорида		Ricca Chemical Company	3120-32	Препарат для тонкого черепа
Микрохирургическое лезвие		Sable Industries	S-6400	Препарат для тонкого черепа
Цианоакрилат 404,401		Локтит	P/N 46551	Препарат для тонкого черепа
Цианоакрилат 401		Loctite	P/N 40140	Препарат для тонкого черепа
Zip Kicker Glue Accelerator		Pacer Technology	PT-29	Препарат для тонкого черепа
Микросверло Стальные жернова диаметром наконечника		Fine Science Tools	19008-07	Препарат для тонкого черепа
Блок управления микрокрутящим моментом и наконечник	Tech2000	Ram Products, Inc.	TECH2000ON/OFF	Препарат для тонкого черепа
#6-0 (0.7 метрический) шелковый шовный материал		Ethicon Inc.	K8894H	с конусом C-1
, 10 см, ширина наконечника 0,5 мм, изогнутые	хирургические инструменты	Fine Science Tools	11152-10
Extra Fine Bonn Ножницы, 8,5 см, прямой наконечник, режущая кромка 13 мм	Хирургические инструменты	Fine Science Tools	14084-08
Щипцы стандартного образца, прямые, 2,5 мм x 1,35 ммтиптип, 12 см	Хирургические инструменты	Fine Science Tools	11000-12