Прижизненные микроскопия микроциркуляции мозга мыши, используя Закрытая черепно Window

Summary

Прижизненные микроскопии следовать временным и пространственным гемодинамики и воспалительных явлений в пиальных микроциркуляцию.

Abstract

Это экспериментальная модель была разработана для оценки мыши пиальных микроциркуляции при остром и хроническом, физиологических и патофизиологических гемодинамики, воспалительных и метаболических условиях, используя в естественных условиях флуоресцентной микроскопии. Закрытой черепно окно находится над левой теменно-затылочной коры мышей. Местные микроциркуляцию записывается в реальном времени через окно с помощью эпи и флуоресцентной подсветкой, и измерения диаметров судов и красных кровяных телец (эритроцитов) скоростей выполняются. РБК скорость измеряется в режиме реального времени кросс-корреляции и / или флуоресцентными меченых эритроцитов. Лейкоцитов и тромбоцитов приверженность мягкой мозговой оболочки сосудов и оценки перфузии и сосудистой утечки сделаны с помощью флуоресценции меченых маркеров, таких как альбумин-FITC и анти-CD45-TxR антител. Микроциркуляции может быть повторно видеокассету в течение нескольких дней. Мы использовали в первый раз закрыть окно мозга прижизненной микроскопии для исследования микроциркуляции пиальных следовать динамические изменения в ходе Plasmodium инфекции berghei ANKA у мышей, и показать, что выражение CM связано с нарушениями микроциркуляции характеризуется сужением сосудов, глубокое снижение артериального потоков и в конечном итоге сосудистого коллапса.

Protocol

1. Краниотомия

Трепанация черепа в 8-к-10-недельных мышей должна быть выполнена заранее, как описано выше ^1, кроме того, что титан бар не помещается в голове животного. Хронические черепно окно стабильной подготовки позволяет рассмотрение пиальных микроциркуляцию даже месяцев после имплантации. Как правило, мы проводим наши исследования через 2-3 недели после имплантации черепных окна.

2. Прижизненные микроскопии

1. Два-три недели после трепанации черепа, температура тела, а затем проверили мышь слегка анестезировали изофлуран (4% для индукции, 1-2% за обслуживание). Свет анестезии используетс....

Discussion

Прижизненной микроскопии описаны здесь представляет собой уникальный и мощный инструмент для детального наблюдения пиальных микроциркуляцию в мышь. Это позволяет выделение отдельных артериол и венул и измерения изменений ряда параметров, таких как диаметре сосудов, РБК скорости, поток крови, соблюдение и подвижного лейкоцитов, тромбоцитов и других элементов крови, сосудистой утечки, рН тканей и рО2 и, возможно, многие другие приложений. В естественных условиях сосудистой реакции может быть оперативно оценивать .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Изофлуран	Бакстер Интернэшнл Инк.
Карбоцианиновый краситель Dil	Molecular Probes, Life Technologies	D306
Альбумин-FITC	Sigma-Aldrich	A9771
Anti-CD45-TxR Ab	Invitrogen	MCD4517
P. berghei ANKA-GFP	MR4	MRA-865