Методическая статья

В режиме реального времени Визуализация лейкотриена B 4 Опосредованного миграции клеток и BLT1 Взаимодействие с β-arrestin

11.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/2315

⸱

23 декабря 2010 г.

 , 
1Microbiology and Immunology, James Graham Brown Cancer Center, University of Louisville

В этой статье

Краткое содержание

Эта статья описывает методологию для определения хемотаксиса лейкоцитов ответ на специфических лигандов и определить взаимодействие между рецепторами клеточной поверхности и цитозольного белков с использованием живых методов визуализации клеток.

Аннотация

Рецепторы, сопряженные с G-белками (GPCR), относятся к семейству белков с семью трансмембранными доменами и опосредуют передачу внеклеточных сигналов для формирования внутриклеточных ответов. GPCR регулируют различные биологические функции, такие как хемотаксис, высвобождение внутриклеточного кальция и регуляция экспрессии генов, причем этот процесс зависит от лиганда и осуществляется через гетеротримерные G-белки1-2. Связывание лиганда вызывает серию конформационных изменений, приводящих к активации гетеротримерных G-белков, которые модулируют уровни вторичных посредников, таких как циклический аденозинмонофосфат (cAMP), инозитолтрифосфат (IP3) и диацилглицерин (DG). Одновременно с активацией рецептора связывание лиганда также инициирует ряд событий, направленных на ослабление передачи сигнала рецептором посредством десенсибилизации, секвестрации и/или интернализации. Процесс десенсибилизации GPCR происходит за счет фосфорилирования рецептора киназами рецепторов, сопряженных с G-белками (GRK), и последующего связывания β-аррестинов3. β-аррестины представляют собой цитозольные белки, которые при активации GPCR транслоцируются к мембране, где связываются с фосфорилированными рецепторами (в большинстве случаев), тем самым способствуя интернализации рецептора 4-6.

Лейкотриен B4 (LTB4) представляет собой провоспалительную липидную молекулу, синтезируемую в результате метаболизма арахидоновой кислоты; он опосредует свои действия через GPCR — рецептор 1 LTB4 (BLT1; высокоаффинный рецептор) и рецептор 2 LTB4 (BLT2; низкоаффинный рецептор)7-9. Было показано, что путь LTB4-BLT1 играет критическую роль при ряде воспалительных заболеваний, включая астму, артрит и атеросклероз10-17. В данной работе описываются методики, разработанные для мониторинга индуцированной LTB4 миграции лейкоцитов, а также взаимодействия BLT1 с β-аррестином и транслокации рецептора в живых клетках с использованием методов микроскопической визуализации18-19.

Дендритные клетки костного мозга мышей линии C57BL/6 были выделены и культивированы, как описано ранее 20-21. Эти клетки были протестированы с помощью методов прижизненной визуализации для демонстрации миграции клеток, индуцированной LTB4. Человеческий белок BLT1 был помечен красным флуоресцентным белком (BLT1-RFP) на C-конце, а β-аррестин1 — зеленым флуоресцентным белком (β-arr-GFP); обе плазмиды были трансфицированы в клеточную линию базофильной лейкемии крыс (RBL-2H3)18-19. Кинетика взаимодействия между этими белками и их локализация отслеживались с помощью видеомикроскопии живых клеток. Методики, описанные в данной работе, касаются использования методов микроскопии для исследования функциональных ответов рецепторов, сопряженных с G-белком, в живых клетках. В данной работе также описывается использование программного обеспечения Metamorph для количественного определения интенсивности флуоресценции с целью установления кинетики взаимодействия рецептора и цитозольных белков.

Протокол

Методология

Описание микроскоп

Живая клетка экспериментов изображений производится с помощью FM-TE-эпи-флуоресценции систему, подключенную к инвертированный микроскоп Nikon Eclipse, TE300. Микроскоп оснащен отопления стадии. Прохладный оснастки HQ цифрового Ч / Б CCD (Roper Scientific) камеры и LAMDA 10-2 оптический фильтр чейнджер (Саттер инструмент компании) крепится к микроскопа. Возбуждение и излучение длиной волны контролируются с фильтром колеса и контролируется Ламба 10-2 фильтр контроллер колесо, Саттер инструменты Co Выдержка 500 мс должно быть достаточно, чтобы посмотреть в ППП или GFP в живых клетках. Аппаратное управление и получение изображений находятся под контролем программного обеспечения Метаморф. Выбор фильтров для настоящего исследования, наборы фильтров S480/20x, S525/40m и S565/25x, S620/60m для GFP и RFP, соответственно; EGFP / DsRed двойной дихроичных, Chroma Technology. Этот фильтр колесо может вместить до шести наборов фильтров. Микроскоп крепится До Проскан контроллер сцене с Джойстик. Все эти вложения аппаратных можно управлять с помощью программного обеспечения Метаморф. Микроскоп также прилагается с Микроманипуляторы провести микропипетки.

А. Измерение лейкотриена B 4 Режиссер Дендритные миграции клеток

Использование описанных выше микроскопом настройки, мы разработали методы для следующих лиганд направлена ​​дендритных миграции клеток в реальном времени. Два микроманипуляторами (Narishige) прикреплены к микроскопа. Хемотаксис костного мозга мышей дендритных клеток (BMDCs) к LTB 4 градиент был записан. Здесь мы опишем методы для подготовки микро-пипетки с использованием микро-пипетки съемник, погрузка лиганда в микро-пипетки и настройка хемотаксис эксперимент на нагревательный столик микроскопа для контроля направленной миграции клеток. Этот метод может быть применен для проверки эффективности различных хемоаттрактантов в стимулировании миграции, а также эффект ингибиторов хемотаксиса в живых клетках. Изоляция BMDCs 21 от мыши был описан в ряде публикаций, включая Юпитер 22.

1. Подготовка BMDCs

  1. Пластина BMDCs (после культивирования в течение 10 дней) на нижней крышке блюдо фтор скольжения и дать им возможность расти в течение 16 ч перед экспериментом.
  2. Вымойте клеток с 3 мл 1X PBS по крайней мере в 2 раза (добавляя 3 мл 1X PBS к плите и аспирационных буфере).
  3. Добавить 2 мл 1XPBS к пластине. Клетки готов к эксперименту. Держите клеток в 37 ° С инкубатор до эксперимента.

Подготовка лиганд загружены микропипетки:

  1. Fix стеклянные капилляры (стекло стандарт, 0,75 мм х 0,4 мм, 6 ", Cat # 625500, А. М. Systems, INC) на вертикальной микропипетки съемник (Narishige Международный США, Inc).
  2. Поддерживать температуру 52 ° С и позволяют стекла для плавления и растащить по форме острия края.
  3. Fix пипетки на микро-пипетки держателя.
  4. Гладкая острые углы микропипетки использованием Micro подделать М-900 (Narishige International США, Inc), наблюдая под микроскопом.
  5. Подготовка по крайней мере 10-20 пипетки для каждого эксперимента. Примечание: микропипетки также можно приобрести от Всемирного точных приборов (μ TIP, T1801TW1F).
  6. Возьмите желаемой концентрации (500 мкл 100 нМ LTB 4 в текущем эксперименте) лиганда в 1 мл effendorf трубку и держать микро кончика пипетки в растворе и, чтобы раствор вступает в микропипетки (засыпка).
  7. Принимать по 1 мл лиганда и в шприц (1 мл туберкулиновые шприцы) и медленно заполнить лиганд использованием микро-Fill иглы (28G MF-5, инструменты Всемирного Precision) в микропипетки сверху.
  8. Прикрепите трубку, которая плотно прилегает к пипеткой пипетки и трубки иглы (21 G 11 / 2) прилагается к 1 мл шприца, который наполнен лиганда.
  9. Теперь, осторожно двигаться лиганд заполнены микро-пипетки на столик микроскопа и закрепить на микро-манипуляторов.
  10. Примените немного давление со шприца, чтобы убедиться, лиганд медленно выпуская из наконечника.
  11. Принесите покрытием незрелых BMDCs к микроскопу и держать их на обогреваемой пластине (37 ° C) стадии.
  12. Удалите крышку фтор блюдо.
  13. Фокус клеток с использованием масляной иммерсии 60X объектива.
  14. Осторожно, сбить лиганд загружены пипетки с помощью "грубой Руководство Манипулятор MN-188NE к близости клеток.
  15. Фокус пипетки с помощью "Гидравлические изобразительных микроманипулятора MN-188 NE '.
  16. Примените немного давление со шприца, чтобы убедиться, что лиганд выпускает в блюдо.
  17. Установите параметры получения изображений приобрести в ярко поданные (10 мс экспозиции) в каждые 15 секунд в течение 2 часов использования Метаморф программного обеспечения.
  18. Держите мониторинг каждые 30 мин для прogression миграции к лиганд.
  19. Если ячейки переполнены на кончике пипетки, изменить расположение кончика в пластине для продолжения миграции эксперимента.

В. Измерение GPCR (BLT1) и цитозольного белка (β-arrestin) взаимодействий, транслокации в живых клетках

1. Подготовка плазмидной конструкции ДНК

Детали ДНК плазмиды конструкции были описаны в Джала и соавт. (2005) 18.

2. Трансфекция по правам BLT1-ППП и β-Arrestin-GFP в RBL-2H3 Клетки

  1. Поддерживать Крыса базофильных Leukomia (RBL-2H3) клетки (от 60 до 70% слияния) при 37 ° C во влажной атмосфере на 95% из воздуха, 5% СО 2, как монослой культур в питательной среде (DMEM дополнена с 15% FBS, 2 мМ L-глутамина, 100 ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл, стрептомицин) в колбах T75.
  2. Отсоедините клетки блюда / колбы с помощью 6 мл трипсина-EDTA (0,05% трипсина, 0,53 мМ ЭДТА) и инкубации в течение 5 мин при 37 ° C во влажной атмосфере 95% воздуха, 5% СО 2. Осторожно встряхните колб для мониторинга масштабов отрыва клеток.
  3. Добавить 6 мл питательной среды в колбе, содержащей 6 мл трипсина-EDTA и собирают клетки, смешивая их с помощью пипетки вверх и вниз несколько раз. Передача клеток в 15 мл труб сокола.
  4. Граф клеток с использованием гемоцитометра и принимать 4 х 10 6 клеток в 15 мл центрифужные пробирки и центрифуги на 480 г оборотов в минуту в течение 3 минут и ресуспендируют в 200 мкл трансфекции СМИ (DMEM, 20% FBS, 50 мМ HEPES). Если вы планируете выполнять 3 трансфекции, подготовить клетки и tranfection СМИ соответственно за счет увеличения числа клеток и объема трансфекции среду.
  5. Подготовка плазмиды для трансфекции в концентрации не менее 1,5 мкг / мкл. Мы готовим ДНК плазмиды с помощью QIAGEN Maxi ДНК плазмиды комплект. Добавить лицо или как плазмиды, кодирующей ДНК для человека BLT1-RFP (25 мкг) и β-arrestin1-GFP (15 мкг) в стерильную кювет электрофореза (Bio-Rad # 16552088), который имеет 0,4 см зазор между электродами.
  6. Возьмите 200 мкл выше ресуспендировали клетки и поместить их в кювет, содержащих либо hBLT1-RFP или β-arrestin1-GFP или оба вместе и смешивать их осторожно с 1 мл стерильной пипеткой.
  7. Оставьте выше кювет при комнатной температуре в течение 10 мин.
  8. Electroporate клеток в генной Pulser II с напряжением 250 В и емкостью 500 мкФ.
  9. После электропорации позволяют клеткам оставаться при комнатной температуре в течение 10 мин.
  10. Принимать по 1 мл регулярной среде рост и смешать его с электропорации клеток в кювет.
  11. Распределить 300 мкл этой смеси на 35 мм ткани со стеклянным дном культуры блюда (фтористый блюдо, инструменты Всемирного Precision), содержащий 2 мл регулярных средах роста и инкубировать в течение 1 часа при температуре 37 ° C во влажной атмосфере на 95% из воздуха, 5% СО 2. Разрешить клетки придерживаться нижней части блюда.
  12. Замените средств массовой информации после 1 ч инкубации с регулярными питательной среды и позволяют им расти при температуре 37 ° C во влажной атмосфере на 95% из воздуха, 5% СО 2 инкубатора в течение 18-24 часов.

3. Живая изображениями сотовый

Приобретение изображений

  1. После 18-24 часов, промыть клетки 2 или 3 раза с 2 мл теплой фенола красного свободной RPMI, содержащего 10 мМ HEPES, рН 7,55 (Добавить 2 мл теплой медиа непосредственно в тарелку и аспирации СМИ. Повторите 2 или 3 раза). Добавить 1,8 мл теплого фенола красного свободной RPMI, содержащего 10 мМ HEPES.
  2. Место 30 мм стекло покровное дном культуры блюд, содержащих RBL-2H3 клеток, трансфицированных hBLT1-ППП и β-arrestin1-GFP на нагревательный столик микроскопа (37 ° С).
  3. Сбор ячейка изображения при увеличении 600x с использованием 60 X цель Nikon Plan Apo 60X/1.4 числовой апертурой нефти погружения линз (в нашем микроскопе системы).
  4. Положите одну нефть упасть на 60 линзы цель х и сосредоточиться клетки с регулярными светлое поле проходящего света, прикоснувшись к нижней части пластины.
  5. Для контроля за флуоресценцию трансфекции белков, переход от светлого поля (проходящий свет) на флуоресцентный фильтр (RFP фильтр, если вы хотите увидеть рецепторов или GFP, если вы хотите увидеть β-arrestin1).
  6. Выберите яркие и здоровые клетки, которая выражает hBLT1-RFP на клеточной поверхности с помощью ППП фильтр и захвата изображений.
  7. Затем переход к GFP фильтр и убедиться, что β-arrestin-GFP выражается в цитоплазме и захвата изображений. Потом псевдо цвета и образы, перед съемкой время, прошедшее изображения в реальном времени клетка, чтобы убедиться, что кровотечение через флуоресценции не принимает, возникающие между ППП и GFP.
  8. После выбора мобильного сделал, установить параметры согласно вашей цели с помощью программного обеспечения (Software Метаморф в данном случае).
  9. В нынешней демонстрации, шестнадцать битных изображений приобретаются пришелра биннинга установлен в 1 X 1 в сочетании с 60 X цель Nikon Plan Apo 60X/1.4 числовой апертурой нефти погружения линз.
  10. Сбор флуоресцентные изображения для ППП и GFP флуорохромами одновременно на 30 сек интервал времени (если транслокация / взаимодействия являются слишком быстро, можно уменьшить интервалы времени) из них с помощью фильтра колеса управляемые программным обеспечением Метаморф.
  11. Раз экспозиции камеры установлен в 1000 мс для ППП и GFP. (Установите определенное время воздействия в соответствии с флуоресцентной интенсивности ППП и GFP).
  12. Первый сбор изображений в течение 1 мин без добавления лиганда, который служит в качестве временной точке 0.
  13. Добавить 200 мкл лиганда (со склада в 10 мкМ до конечной концентрации 1 мкМ) через 1 мин, не нарушая пластина / или сотовый позиции.
  14. Флуоресцентные изображения собираются в течение 60 мин после добавления лиганда и хранится в виде изображений TIFF с возрастающим порядком имен файлов.
  15. Все эти файлы могут быть сделаны как стек файлы с отдельными / комбинированной флуоресцентные изображения с метками времени с помощью программного обеспечения.

Процесс изображения и количественное определение флуоресценции белков и локализации

  1. Приобретать изображений с простым СМИ (без клеток) с ППП и GFP флуоресцентных фильтров и сохранить их в качестве фоновых изображений. Используйте эти образы вычесть из реальных изображений данные, полученные выше.
  2. Подготовка стека изображений индивидуально для ППП и GFP изображений.
  3. Выбор / определяем различных регионах (против цитозольного поверхности) для измерения интенсивности флуоресценции ППП и GFP (BLT1 и β-arrestin транслокации)
  4. Участок сумма интенсивности флуоресценции как функция времени. Этот график будет предоставлять информацию о кинетике транслокации данной молекулы.

Представитель Результаты

А. Измерение лейкотриена B 4 Режиссер Дендритные миграции клеток

Метод, описанный в этом протоколе была использована для определения дендритных миграции клеток к лейкотриен B 4 (рис. 1 и прилагается видео 1) 21. Мы можем применить аналогичные методологии для определения хемотаксиса способности клеток к определенному лиганд в живых клетках.

Рисунок 1
Рисунок 1. Костного мозга мышей дендритных миграции клеток к 100 нм LTB 4.

Видео 1. Живая клетка миграции BMDCs к LTB 4. Нажмите здесь для просмотра видео .

В. Измерение GPCR (BLT1) и цитозольного белка (β-arrestin) взаимодействий, транслокации в живых клетках

По завершении этой процедуры, можно получить следующую информацию в GPCR сигнальных событий.

  1. Локализация GPCR и цитозольного белков и ядра (рис. 2).
  2. Лиганд индуцированного взаимодействия поверхностных GPCR (BLT1 в данном случае) с цитозольного белка (β-arrestin в данном случае) (рис. 3).
  3. Кинетика интернализация рецепторов и β-arrestin транслокации к мембранным следуют интернализации вместе с рецепторами (рис. 4) (Джала и соавт. 2005) 18.
  4. Можно определить лиганд зависимый статус активации рецепторов в живых клетках (прилагается видео-2) и определения критических мотивов или процессы активации рецептора (Джала и соавт. 2005) 18.

Рисунок 2
Рисунок 2. Выражение BLT1-RFP (А), β-arrestin-GFP (Б), pNuc-CFP (С) в RBL-2H3 клеток. Цвет комбинированное изображение показано на панели D.

Рисунок 3
Рисунок 3. Лиганд индуцированных транслокации рецепторов и β-arrestin. Линия сканирования флуоресцентных интенсивности в клетки показано на рисунке.

Рисунок 4
Рисунок 4. Кинетика интернализация рецепторов и β-arrestin транслокации при добавлении 1 мкМ LTB 4. Интенсивности флуоресценции измеряли как функцию времени на мембране и цитоплазме местах клетки.

Видео 2 Live изображений клеток, экспрессирующих BLT1-ППП и β-arrestin-GFP при добавлении 1 мкМ LTB 4. Нажмите здесь, чтобы посмотреть видео

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Живая клетка изображений является мощным инструментом для демонстрации функции и взаимодействие специфических белков, как они происходят в режиме реального времени. Методы, описанные в этой рукописи ясно показывают, что LTB 4 может вызвать быструю миграцию дендритных клеток. Эти методы не только расширить аспекты LTB 4 функции разнообразных типов клеток, они позволяют подобные методы, применяемые к ряду других хемокинов и тестирования их эффективности в качестве агентов на хемотаксиса лейкоцитов ра...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Нет конфликта интересов объявлены.

Благодарности

Исследование поддержано Национальным институтом здоровья гранты АИ-52 381, CA138623 и Кентукки рака легких совета исследований и организационной поддержке со Джеймс Грэм Браун онкологический центр.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Линия клеток базофильной лейкемии крысы (RBL-2H3) или клетки HEK293.ATCCCRL-2256
Дельбекко’модифицированная среда Игла (Eagle)’среда DMEM (дуло-МcCой)Invitrogen11995
Среда RPMI или DMEM без фенолового красногоInvitrogen11835-030
Фетальная бычья сывороткаInvitrogen16000-044
L-глутамин (200 мМ)Invitrogen25030
Пенициллин-стрептомицин (10000 ЕД/мл)Invitrogen15140
Трипсин, 0,05% (1X) с ЭДТА 4Na, жидкийInvitrogen25300
HEPES (1 М)Invitrogen15630
стерильные стеклянные чашки Fluoro с покровным стеклом (толщиной 0,17 мм) диаметром 35 мм (WillCo-dish)World Precision Instruments, Inc.FD35-100
Стерильная кювета для Gene Pulser (зазор между электродами 0,4 см) (Bio-Rad)Bio-Rad16552088
электропоратор Gene Pulser II Bio-Rad
Система эпифлуоресценции TE-FM, установленная на инвертированном микроскопе Nikon Eclipse TE300Приборы Nikon
Программное обеспечение MetamorphУниверсальная визуализация
Вертикальный вытягиватель микропипетокNarishige International
Micro-Forge M-900Narishige International
Гидравлический микроманипулятор MO-188NENarishige International
Грубый ручной манипулятор, MN-188NENarishige International
<сильный>конструкции кДНК:
кДНК G-белоксопряженного рецептора с меткой в виде красного флуоресцентного белка на C-конце (hBLT1-RFP)Джала и соавт. 2005
кДНК цитозольного белка с GFP-меткой (β-arrestin1-GFP в настоящем исследовании).Джала и др., 2005

Ссылки

  1. Wess, J. G-protein-coupled receptors: molecular mechanisms involved in receptor activation and selectivity of G-protein recognition. FASEB J. 11, 346-354 (1997).
  2. Gether, U. Uncovering molecular mechanisms involved in activation of G protein-coupled receptors. Endocr Rev. 21, 90-113 (2000).
  3. Pierce, K. L., Premont, R. T., Lefkowitz, R. J. Seven-transmembrane receptors. Nat Rev Mol Cell Biol. 3, 639-650 (2002).
  4. Lefkowitz, R. J. G. protein-coupled receptors. III. New roles for receptor kinases and beta-arrestins in receptor signaling and desensitization. J Biol Chem. 273, 18677-18680 (1998).
  5. Shenoy, S. K., Lefkowitz, R. J. Multifaceted roles of beta-arrestins in the regulation of seven-membrane-spanning receptor trafficking and signalling. Biochem J. 375, 503-515 (2003).
  6. Beta-arrest or. Nature. 383, 447-450 (1996).
  7. Serhan, C. N., Haeggstrom, J. Z., Leslie, C. C. Lipid mediator networks in cell signaling: update and impact of cytokines. Faseb J. 10, 1147-1158 (1996).
  8. Tager, A. M., Luster, A. D. BLT1 and BLT2: the leukotriene B(4) receptors. Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 69, 123-134 (2003).
  9. Toda, A., Yokomizo, T., Shimizu, T. Leukotriene B4 receptors. Prostaglandins Other Lipid Mediat. 68-69, 575-585 (2002).
  10. Haribabu, B. Targeted disruption of the leukotriene B(4) receptor in mice reveals its role in inflammation and platelet-activating factor-induced anaphylaxis. J Exp Med. 192, 433-438 (2000).
  11. Subbarao, K. Role of leukotriene B4 receptors in the development of atherosclerosis: potential mechanisms. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 24, 369-375 (2004).
  12. Jala, V. R., Haribabu, B. Leukotrienes and atherosclerosis: new roles for old mediators. Trends Immunol. 25, 315-322 (2004).
  13. Heller, E. A. Inhibition of atherogenesis in BLT1-deficient mice reveals a role for LTB4 and BLT1 in smooth muscle cell recruitment. Circulation. 112, 578-586 (2005).
  14. Miyahara, N. Requirement for leukotriene B4 receptor 1 in allergen-induced airway hyperresponsiveness. Am J Respir Crit Care Med. 172, 161-167 (2005).
  15. Terawaki, K. Absence of leukotriene B4 receptor 1 confers resistance to airway hyperresponsiveness and Th2-type immune responses. J Immunol. 175, 4217-4225 (2005).
  16. Shao, W. H., Del Prete, A., Bock, C. B., Haribabu, B. Targeted disruption of leukotriene B4 receptors BLT1 and BLT2: a critical role for BLT1 in collagen-induced arthritis in mice. J Immunol. 176, 6254-6261 (2006).
  17. Kim, N. D., Chou, R. C., Seung, E., Tager, A. M., Luster, A. D. A unique requirement for the leukotriene B4 receptor BLT1 for neutrophil recruitment in inflammatory arthritis. J Exp Med. 203, 829-835 (2006).
  18. Jala, V. R., Shao, W. H., Haribabu, B. Phosphorylation-independent beta-arrestin translocation and internalization of leukotriene B4 receptors. J Biol Chem. 280, 4880-4887 (2005).
  19. Jala, V. R., Haribabu, B. Real-time analysis of G protein-coupled receptor signaling in live cells. Methods Mol Biol. 332, 159-165 (2006).
  20. Del Prete, A., A, Regulation of dendritic cell migration and adaptive immune response by leukotriene B4 receptors: a role for LTB4 in up-regulation of CCR7 expression and function. Blood. 109, 626-631 (2007).
  21. Salogni, L. Activin A induces dendritic cell migration through the polarized release of CXC chemokine ligands 12 and 14. Blood. 113, 5848-5856 (2009).
  22. Boudreau, J., Koshy, S., Cummings, D., Wan, Y. Culture of myeloid dendritic cells from bone marrow precursors. J Vis Exp. , (2008).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

BLT1GPCRMetamorph

Похожие статьи