Оценка взаимодействия бактерий и клеток-хозяев с помощью биомиметических шариков

Аннотация

Источник: Stones, D. H., et al. Биомиметические материалы для характеристики взаимодействия бактерий и хозяина. J. Vis. Exp. (2015)

В этом видео демонстрируется использование бактериомиметических гранул для количественной оценки адгезии бактерий к эпителиальным клеткам хозяина в конкурентных условиях. В нем описываются этапы, связанные с обработкой клеток, их лизисом и нанесением серийных разведений для измерения колониеобразующих единиц.

Протокол

1. Измерение адгезии бактерий
   1. В указанные моменты времени (например, через 1 час после заражения) удалите среду из клеточного слоя.
   2. Тщательно промойте слой клеток стерильным, предварительно подогретым фосфатно-солевым буфером (PBS) (не менее 3-4 промываний по 1 мл PBS каждое), чтобы удалить все неприкрепленные клетки.
   3. Лизируйте клетки-хозяева путем добавления 1 мл стерильного 1 % v/v раствора Triton X-100 в PBS на лунку. Выдерживать пластину при температуре 37 °C в течение 5 минут.
   4. Пипеткой вверх и вниз по каждому образцу несколько раз, прежде чем перенести содержимое каждой лунки в отдельные пробирки объемом 1,5 мл. Приготовьте 10-кратное серийное разведение образцов в стерильный PBS (например, используйте 100 мл образца и 900 мл PBS).
   5. Нанесите 100 мкл каждого образца на морской агар Лурия-Бертани (MLB) и распределите с помощью разбрасывателя ячеек. Оптимизируйте, какие разведения следует проводить в зависимости от штаммов бактерий и временного момента.
      Примечание: Для описанной экспериментальной установки 10⁵ или 10 6-кратных разведений дают подходящее количество колониеобразующих единиц (КОЕ).
   6. Инкубируйте планшеты при 37 °C O/N и подсчитайте бактерии путем подсчета колоний.

Материалы