В этом видео показана предварительная обработка макрофагов везикулами внешней мембраны (OMV) Legionella pneumophila для изучения их влияния на репликацию бактерий. Изменяя иммунную сигнализацию хозяина, OMV делают макрофаги более восприимчивыми к инфекции. Более высокое количество колоний в обработанных клетках по сравнению с необработанными указывает на то, что OMV способствуют репликации L. pneumophila внутри макрофагов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Анализ репликации Legionella pneumophila в макрофагах, предварительно обработанных наружными мембранными везикулами
604 просмотров
⸱
29 августа 2025 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
1. Перед обработкой макрофагов
- подготовьте клетки THP-1 (клетки больницы Тохоку Педиатрикс-1, клеточная линия моноцитарного лейкоза человека).
ПРИМЕЧАНИЕ: THP-1 - это моноцитарная клеточная линия, полученная от пациента с лейкемией.- Добавьте 2x105 клеток THP-1 на 24 лунки и дифференцируйте их, добавив 20 нМ форбол 12-миристат 13-ацетат (PMA) в макрофагоподобные клетки. Инкубировать в течение 24 ч при 37 °C.
- Замените среду 500 μл свежей среды и инкубируйте еще 24 ч; оптимальная среда для клеток THP-1 состоит из среды Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 с высоким содержанием ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 10 cm petridish | Sarstedt AG & Co KG (Nuembrecht, Германия) | 82.1473 | |
| Активированный уголь | Carl Roth GmbH & Co KG (Карлсруэ, Германия) | X865.2 | |
| Агар-агар, Kobe I | Carl Roth GmbH & Co KG (Карлсруэ, Германия) | 5210.2 | |
| Агар колумбийский с 5 % овечьей крови | Becton Dickinson GmbH (Гейдельберг, Германия) | 254005 | |
| Нонагидрат нитрата железа | Carl Roth GmbH & Co KG (Карлсруэ, Германия) | 5632.1 | |
| Фетальная телячья сыворотка (FCS) | Life Technologies GmbH (Дармштадт, Германия) | 10270-106 | |
| Инкубатор углекислого газа Heracell 240i | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Брауншвейг, Германия) 40830469 | ||
| Heraeus Multifuge X3R | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Брауншвейг, Германия) 75004515 | ||
| петля инокуляции | Sarstedt AG & Co KG (Nuembrecht, Германия) | 86.1567.010 | |
| L. pneumophila Corby | --- | --- | Любезно предоставлено профессором д-ром Антье Флигером (RKI, Берлин, Германия) |
| L. pneumophila Corby ΔflaA | --- | --- | Любезно предоставлено профессором д-ром Клаусом Хойнером (RKI, Берлин, Германия) |
| mBMDM | ------ | Любезно предоставлено профессором д-ром Маркусом Шнаре (Университет им. Филиппа Марбурга, Марбург, Германия) и профессором д-ром Карстеном Киршнингом (Университет Дуйсбурга Эссена, Эссен, Германия) | |
| PBS | Biochrom GmbH (Берлин, Германия) | L 1825 | |
| Phorbol 12-миристат 13-ацетат | Sigma-Aldrich Chemie GmbH (Тауфкирхен, Германия) | P8139-1MG | |
| Вращающийся шейкер (MaxQ 6000) | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Брауншвейг, Германия) | SHKE6000 | |
| RPMI 1640 high glucose | Life Technologies GmbH (Дармштадт, Германия) | 11875-093 | |
| Saponin | Carl Roth GmbH & Co KG (Карлсруэ, Германия) | 9622.1 | |
| Ultrospec 10 | Biochrom Ltd (Кембридж, Англия) | 80-2116-30 | |
| THP-1 | Sigma-Aldrich Chemie GmbH (Тауфкирхен, Германия) | 88081201-1VL | |
| Sorvall Discovery 100 SE | Thermo Fisher Scientific Germany BV & Co KG (Брауншвейг, Германия) | ||
| Дрожжевой экстракт | Carl Roth GmbH & Co KG (Карлсруэ, Германия) | 2363.2 |
