$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Штаммы бактерий
ЗАМЕТКА: Для этого эксперимента использовали девять стандартных штаммов, в том числе Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Fusobacterium nucleatum, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1, Proteus vuigaris и Klebsiella pneumoniae. Сальмонелла паратифи A, Fusobacterium nucleatum, Pseudomonas aeruginosa и Proteus vuigaris могут продуцироватьH2S.
- Подготовка бактериального посева
- Перенесите одну колонию бактерий Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa PAO1, Aeromonas hydrophila YJ-1 и Klebsiella pneumoniae из агарового планшета Лурия-Бертани (LB) в 100 мл среды LB и культивируйте при 37 °C в течение 12-16 ч до тех пор, пока концентрация бактерий не составит около 1 x 109 клеток/мл (как указано в OD600 = 1).
- Перенесите одну колонию бактерий Fusobacterium nucleatum и Proteus vuigaris из агаровых планшетов триптиказы соевого бульона (TSB) в 100 мл среды TSB и культивируйте при 37 °C анаэробно в течение 24 ч до тех пор, пока концентрация бактерий не составит около 1 x 109 клеток/мл (как указано OD600 = 1).
2. Анализ обнаружения H2S
- Испытание производства сероводорода
- Смешайте 100 мкл бактериальной культуры со 100 мкл вновь приготовленного раствора висмута (pH 8,0; 10 мМ хлорида висмута (III), 0,4 М триэтаноламина-HCl, 20 мМ пиридоксаль-5-фосфата моногидрата, 20 мМ ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) и 40 мМ L-цистеина) в 96-луночных микротитровальных планшетах и культуре в течение 20 мин при 37 °C. Для каждого штамма бактерий выполняйте анализ в трех экземплярах.
- Через 20 минут проверьте изменение цвета. Если цвет раствора меняется со светло-желтого на черный, это говорит о том, что бактерия способна вырабатывать H2S. Повторите это измерение 3 раза.
- Чувствительность метода
- Определяют чувствительность метода с использованием различных концентраций гидросульфида натрия (NaHS): 2 мМ, 1 мМ, 0,8 мМ, 0,6 мМ, 0,4 мМ, 0,2 мМ, 0,1 мМ и 0 мМ, смешанных с раствором BS (сульфида висмута).
- Определите наличие HS−/S2− , наблюдая за образованием черного осадка BS. Оцените цвет лунок с помощью визуальной шкалы от отсутствия цвета (-) до самого темного черного цвета (++++++).