В этом видео показано выращивание и выделение спор из Streptomyces venezuelae. Споры, спящие клетки, которые помогают бактериям пережить стресс, образуются во время ограничения питательных веществ и собираются с помощью центрифугирования. Этот метод обеспечивает получение чистой суспензии спор холодного хранения для последующих применений.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Получение и выделение спор Streptomyces venezuelae из жидкой культуры
824 просмотров
⸱
26 сентября 2025 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
1. Выделение свежих спор Streptomyces venezuelae и приготовление отработанной питательной среды
- Инокулируйте 30 мл среды мальтозно-дрожжевого экстракта солодового экстракта (MYM) с добавлением 60 мкл раствора микроэлемента R2 (TE) с 10 мкл спор штамма SV60 [attBφBT1::p SS209 (PdivIVA-divIVA-mcherry PftsZ-ftsZ-ypet)]. Для постоянного роста и спорообразования клеток используйте колбу с перегородкой или колбу с пружиной, обеспечивающей достаточную аэрацию.
- Культивирование клеток в течение 35-40 ч при 30 °C и 250 об/мин.
- Исследуйте клетки с помощью жидкостной фазово-контрастной микроскопии. На этом этапе будут видны фрагменты мицелия и сп....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Мальтозо-дрожжевой экстракт солода (MYM)4 г мальтозы4 г дрожжевого экстракта10 г солодового экстрактадобавить 1 л H2O с использованием 50 % водопроводной воды и 50 % воды обратного осмоса и добавить 200 мл раствора микроэлемента R2 на 100 мл после автоклавирования | Спороносная среда, используемая для культивирования Streptomyces venezuelae SV60 | ||
| R2 Раствор микроэлемента (TE)8 мг ZnCl240 мг FeCl 3-6H2O2 мг CuCl 2-2 O2мг MnCl2-4H 2O2 мг Na2B4O7-10H 2O2 мг (NH4)6Mo7O24-4H 2Oadd 200 мл H2OAutoclave и хранить при температуре 4 °C | Добавление 0.002 томов в MYM | ||
| PBS (фосфатно-солевой буфер) | Сигма | П4417-100ТАБ | Используется для заправки входных колодцев неиспользуемых полос в плитах В04А с целью подготовки плиты к кратковременному хранению. |
| Шприцевые фильтры 0,22 мкм | Satorius stedim | 16532-К | Заготовка отработанного МИМ-ТЭ |
Теги
