Новая хромогенная среда для быстрого обнаружения видов вибрионов

Аннотация

Источник: Yeung, M., et al. Разработка более чувствительной и специфичной хромогенной агаровой среды для обнаружения Vibrio parahaemolyticus и других видов вибрионов . J. Vis. Exp. (2016)

В этом видео демонстрируется культуральный метод идентификации видов вибрионов , при этом выделяется хромогенный агар как более точная альтернатива широко используемому тиосульфат-цитрат-желчным солям-сахарозе или агару TCBS. Хромогенный агар обеспечивает превосходную дифференцировку штаммов вибрионов за счет обнаружения видоспецифичной ферментативной активности.

Протокол

Рост на селективных и дифференциальных средах

1. За два-четыре дня до эксперимента поместите все штаммы микроорганизмов в неселективную среду (TSAS, BHI или шоколадный агар) для выделения колоний. Инкубируйте планшеты при температуре 35-37 °C в течение 48 часов. Проверяйте чистоту культур, наблюдая за морфологией колонии после инкубации. Чистые культуры должны давать колонии, которые демонстрируют сходную морфологию колоний.
2. Переложите несколько изолированных колоний в 5 мл отвара. Инкубируйте пробирки при температуре 35-37 °C в течение 16-24 часов.

ЗАМЕТКА: Используйте молодые колонии, возраст которых не превышает четырех дней, для подготовки ночных культур во всех экспериментах.

3. Проведите цикл ночных культур на селективных и дифференциальных средах (TCBS и хромогенный агар) для выделения колоний. Инкубируйте планшеты при температуре 35-37 °C в течение 96 часов.
4. Запишите общий рост всех штаммов, изучив как плотность культуры на планшете, так и размер изолированных колоний. Запишите цвет колоний под воздействием окружающего и/или ультрафиолетового света. Обратите внимание на другие характеристики изолированной колонии, такие как высота, граница и форма.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Реагенты/оборудование
Агар	Научный центр Фишера	ДФ0140-15-4	может использовать другие бренды
Порошок BHI	Научный центр Фишера	ДФ0418-17-7	может использовать другие бренды
Газогенератор CampyGen	Диагностика Харди	CN035A	для обеспечения микроаэрофильной атмосферы; может использовать другие бренды
Шоколадные агаровые тарелки	Диагностика Харди	Е14	может использовать другие бренды
Пробирки для культивирования	Научный центр Фишера	С50712	может использовать другие бренды
Агаровые пластины HardyChrom Vibrio	Диагностика Харди	Г319	В данном исследовании оценивается эта среда
Инкубатор	Любой
Инокуляционные петли	Научный центр Фишера	22-363-606	В этом исследовании использовался размер 10 микролитров
Чашка Петри	Научный центр Фишера	FB0875713	может использовать другие бренды
Пипетка и наконечники	Любые стерилизованные наконечники
Порошок TCBS	Диагностика Харди	265020	В данном исследовании оценивается эта среда
Порошок TSB	Научный центр Фишера	ДФ0370-07-5	может использовать другие бренды
Шкаф для просмотра ультрафиолетового излучения	Любой		Излучайте длинноволновый ультрафиолетовый свет
Водяная баня	Любой
Виды и штаммы бактерий
Аэромонада гидрофила (Aeromonas hydrophila)	АТКС
Кандида альбиканс (Candida albicans)	АТКС
Campylobacter jejuni	АТКС
Кишечная палочка	АТКС
Proteus mirabilis	АТКС
Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa)	АТКС
Золотистый стафилококк	АТКС
Холерезус (Salmonella choleraesuis)	АТКС
Shigella boydii	АТКС
Шигелла флекснери	АТКС
Shigella sonnei	АТКС
Альгинолитический вибрион	АТКС
V. cholerae (серотипы включают биовары O139, O1, non O1, El Tor)	FDA, ATCC
V. damsela	FDA
V. fisheri	Окружающая среда
V. fluvialis	CDC
V. furnissii	CDC
V. hollisae	FDA
V. metschnikovii	АТКС
V. mimicus	FDA
V. parahaemolyticus (серотипы включают O3:K6, O1:K56, O4:K8, O5:K15, O8 и т.д.)	ATCC, FDA, CDC, Окружающая среда
V. proteolyticus	FDA
V. vulnificus	FDA