Затопление рассады для скрининга бактериальной резистентности томатов

Аннотация

Источник: Hassan, J.A., et al. Высокопроизводительная идентификация резистентности к Pseudomonas syringae pv. Томат в томате с использованием пробирного анализа рассады. J. Vis. Exp. (2020).

В этом видео демонстрируется метод скрининга бактериальной резистентности у различных сортов томатов с использованием десятидневной рассады, инокулированной бактериальной суспензией. В ней объясняется, как бактерии проникают через устьица, доставляют эффекторные белки для подавления иммунитета растений и как различаются реакции растений между восприимчивыми и устойчивыми штаммами. Результат оценивается путем наблюдения за видимыми различиями в росте, при этом устойчивые растения остаются здоровыми, а восприимчивые демонстрируют повреждение тканей.

Протокол

1. Метод заливки рассады томатов

1. Выньте пластины с 10-дневной рассадой из камеры выращивания и поставьте в шкаф биобезопасности, чтобы подготовить пластины к затоплению.
2. Снимите хирургическую ленту с двух пластин.
3. Установите таймер на 3 мин. Отмерьте 6 мл конечного посевного материала P. syringae pv. томат (Pst) (Pst19 OD₆₀₀ = 0,0075 или PstDC3000 OD₆₀₀ = 0,005) и перенесите по 6 мл инокулюма на каждую пластину с 10-дневной рассадой.
4. Аккуратно протолкните рассаду вниз в инокулянт стерильным кончиком пипетки. Запустите таймер.
5. Держите по одной тарелке в каждой руке. Наклоните переднюю часть пластины вниз, чтобы накопился инокулюм и в основном погрузите семядоли и листья рассады.
6. Похлейте из стороны в сторону 5–7 раз, а затем откиньте пластины назад, чтобы покрыть корни и всю пластину.
7. Снова наклоните пластины вниз, чтобы погрузить семядоли и листья, и повторяйте в общей сложности 3 минуты.
8. Вылейте инокулянт с пластин, поставьте пластины на плоскую поверхность, а затем слейте остатки инокулята во второй раз.
9. Оберните пластины хирургической лентой и повторите шаги 1.2–1.8 для всех оставшихся пластин.
10. Повторно инкубируйте пластины в камере роста после того, как все пластины будут затоплены.

Фенотип через 7–10 дней для PstDC3000 или через 10–14 дней для Pst19.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Шкаф биобезопасности, класс II тип А2
БРЕНД Одноразовые пластиковые кюветы, полистирол	VWR Интернэшнл	47744-642
Зубочистки из плоской древесины Sinille Kraft	VWR Интернэшнл	500029-808
Стеклянная спиртовая горелка Фитиль	Научный центр Фишера	S41898A / No. Ш-125
Стеклянные спиртовые горелки	Научный центр Фишера	S41898 / No. БО125
Реагент глицерин ACS	VWR Интернэшнл	EMGX0185-5
Kimberly-Clark™ Kimtech Science™ Салфетки™ для деликатных задач	Научный центр Фишера	06-666-А
Хлорид магния, класс ACS	VWR Интернэшнл	97061-356
Гептагидрат сульфата магния, класс ACS	VWR Интернэшнл	97062-130
Микроцентрифужные пробирки, 1,5 мл
Микроцентрифужные пробирки, 2,2 мл
Мурасиге и Скуг, Базальные соли	Кессон Лабораториз, Инк.	МСП01-50ЛТ
Pipet-Lite XLS LTS 8-канальная пипетка 20-200 мкл	Райнин	L8-200XLS
Pipet-Lite XLS LTS 8-канальная пипетка 2-20 мкл	Райнин	L8-20XLS
Полистирол 100 мм x 25 мм стерильная чашка Петри	VWR Интернэшнл	89107-632
Полистирол 150 мм x 15 мм стерильная чашка Петри	Научный центр Фишера	ФБ08-757-14
Полистирол 150x15мм стерильная чашка Петри	Научный центр Фишера	08-757-148
Наконечники LTS 20 μL 960/10 GPS-L10	Райнин	17005091
Наконечники LTS 250 μL 960/10 GPS-L250	Райнин	17005093