$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Вскрытие кишечника личинки данио-рерио для восстановления жизнеспособного Clostridioides difficile
- Изолируйте желудочно-кишечный тракт от личинок для анализа бактериальной нагрузки. Начните с усыпления личинок рыбок данио 0,4 % трикаина.
- Коротко промойте рыбок данио стерильным 1x PBS (фосфатно-солевой буфер) и переложите их на свежую агарозную тарелку.
- Вскрытие данио-рерио
- Вставьте иглу в спинной ствол личинок данио-рерио близко к голове, чтобы обездвижить данио-рерио. Удалите голову за жабрами с помощью ланцета.
- Вторую иглу вставьте в середину спинного туловища. Введите третью иглу в брюшную полость данио-рерио и вытяните кишечник из полости тела.
ЗАМЕТКА: Для изоляции неповрежденного кишечника необходима крайняя осторожность. Если это затруднительно сделать, выполните дополнительные тяги, чтобы отделить остальную часть кишечника от остальных внутренних органов. - С помощью иглы для микроинъекций переведите 10–15 кишечников в пробирку объемом 1,5 мл, содержащую 200 мкл стерильного 1x PBS.
- Гомогенизируйте кишечник с помощью пестика, чтобы разрушить ткани и приготовить гомогенаты. Убедитесь, что пестик достигает дна трубки, чтобы полностью нарушить работу всех кишечников.
- Инкубируйте гомогенаты в среде для выращивания C. difficile , содержащей D-циклосерин и цефокситин, с таурохолатом (ТСА, зародышевый из спор C. difficile ) или без него в анаэробной камере.
- Инкубировать планшет анаэробно в течение 48 ч при 37 °C.