В этом видео демонстрируется использование микрофлюидного чипа для визуализации и сравнения роста и морфологии штаммов E. coli дикого типа и устойчивых к триметоприму штаммов кишечной палочки в условиях стресса антибиотиком триметоприма.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Рост бактерий на микрофлюидном чипе для изучения лекарственной устойчивости к антибиотикам
495 просмотров
⸱
26 сентября 2025 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
1. Эксперимент по выращиванию чипа
- Перед загрузкой в микрофлюидное устройство промойте его деионизированной водой в течение 1 часа и средой M9 в течение 1 часа.
- Ежедневно замороженный образец разморозьте при комнатной температуре в течение 5 минут и закиньте в новую пробирку свежей средой M9. Поместите образец в шейкер при температуре 37 °C на ночь.
- Разбавьте микробный образец в 10 раз средой M9 и загрузите его в микрофлюидное устройство, нагнетая давление в контейнер с микробным образцом под давлением 5 фунтов на квадратный дюйм. Затем загрузите среду триметоприма (TMP) в чип, нагнетая давление в контейнер с лекарственной средой под давлением 5 фунтов на квадратный дюйм. Выполните смешивание между микробом и лекарственным препаратом, приводя в действие микромеханический клапан между двумя камерами на микрофлюидном чипе в течение 15 минут.
- Поместите микрофлюидный чип в микроскоп-инкубатор, установленный на инвертированном микроскопе. Получайте изображение клетки в ростовой камере каждый час в течение 8 часов с помощью ПЗС-камеры, установленной на инвертированном микроскопе.
- Используйте пользовательский программный скрипт для вычисления номеров ячеек с помощью алгоритма пороговых значений на основе данных изображения ячейки. Обратите внимание, что данные о количестве клеток обычно усредняются по трем микрофлюидным камерам.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Инвертированный микроскоп | Leica Microsystems | Leica DMI-LED | используется для микрофлюидных измерений Используйте объектив X40 NA=0,55 |
| Микроскоп-инкубатор | Инструмент Live Cell | CU-109 | используется для микрофлюидных измерений |
| Электромагнитные клапаны | Пневмодин | С10ММ-31-12-3 | Нормально разомкнутый 1,3 Вт 12 В постоянного тока |
| Интерфейсная плата USB | Хобби Инженерия | Модуль цифрового ввода-вывода USBIO24-R | для измерения микрофлюидики |
| Воздушный компрессор | Рокер Сайентиал | КОРОМЫСЛО 440 | Источник давления для микрофлюидов макс. давление 80 фунтов на квадратный дюйм |
| Фитинги с наружной резьбой luer-lock для заусенцев 1/8" | ValuePlastics.com | MTLL230-1 | используется для микрофлюидного контроля |
| Заусеница 1/8" к резьбовому порту 10-32 | ValuePlastics.com | В-1 | используется для микрофлюидного контроля |
| Фитинги с внутренним люэровским замком к резьбовому порту 10-32 | ValuePlastics.com | КФТЛ-1 | используется для микрофлюидного контроля |
| NPN дарлингтонский транзистор 500мА, 40В (2N6427) | DigiKey.com | 2Н6427ГОС-НД | используется для микрофлюидного контроля |
| 10 кОм, углеродный пленочный резистор, 0,25 Вт | DigiKey.com | P10KBACT-ND | используется для микрофлюидного контроля |
| Танталовый конденсатор, 10мкФ, 25В, 10% | DigiKey.com | 478-1841-НД | используется для микрофлюидного контроля |
| ПЗС-камера Andor | Андор | Zyla 4.2 Plus SCMOS | Используется для микрофлюидной визуализации на чипе |
| Триметоприм | Сигма | ||
| Difco M9 минимальная соль 5x | БД | Терпимая |
Теги
