Получение протопластов из грамположительной бактерии Bacillus megaterium

Аннотация

Источник: Figueroa, D.M., et al. Получение и визуализация бактериальных сферопластов и протопластов для характеристики локализации антимикробных пептидов. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео показана пошаговая процедура получения протопластов из грамположительной бактерии Bacillus megaterium.

Протокол

1. Приготовление раствора

1. Приготовьте 5 мг/мл лизоцима, растворив 0,015 г лизоцима в 3 мл dH₂O в колбе объемом 50 мл. Стерилизовать путем фильтрации через шприц-фильтр диаметром 25 мм с мембраной 0,2 мкм. Аликвотный раствор разложить по микрофуге и хранить при температуре -20 °С.
2. Приготовьте 3% w/v соевого бульона триптиказы (TSB), растворив 30 г TSB в 1 л dH₂O в колбе объемом 2 л. Разложите раствор по колбам, содержащим 100 мл TSB, для использования при получении протопластов B. megaterium . Автоклавные колбы для стерилизации жидкой среды. Стерильный TSB можно хранить при комнатной температуре или при температуре 4 °C.
....

Результаты

Рисунок 1: Репрезентативные изображения бактерий B. megaterium. (A) B. megaterium и (B) протопласта B. megaterium. Снимки были сделаны при 100-кратном ув.......

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Хлорид магния	Сигма	М8266
Сахароза	Сигма	С7903
Лизоцим	Сигма	Л6876
Соевый бульон BBL Trypticase	Научный центр Фишера	В11768
Малеиновая кислота	Сигма	М0375
Шприцевой фильтр Acrodisc 25 мм с мембраной HT Tuffryn 0,2 мкм	Корпорация Pall	4192