Получение протопластов из грамположительной бактерии Bacillus megaterium

Аннотация

Источник: Figueroa, D.M., et al. Получение и визуализация бактериальных сферопластов и протопластов для характеристики локализации антимикробных пептидов. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео показана пошаговая процедура получения протопластов из грамположительной бактерии Bacillus megaterium.

Протокол

1. Приготовление раствора

1. Приготовьте 5 мг/мл лизоцима, растворив 0,015 г лизоцима в 3 мл dH₂O в колбе объемом 50 мл. Стерилизовать путем фильтрации через шприц-фильтр диаметром 25 мм с мембраной 0,2 мкм. Аликвотный раствор разложить по микрофуге и хранить при температуре -20 °С.
2. Приготовьте 3% w/v соевого бульона триптиказы (TSB), растворив 30 г TSB в 1 л dH₂O в колбе объемом 2 л. Разложите раствор по колбам, содержащим 100 мл TSB, для использования при получении протопластов B. megaterium . Автоклавные колбы для стерилизации жидкой среды. Стерильный TSB можно хранить при комнатной температуре или при температуре 4 °C.
....

Результаты

Рисунок 1: Репрезентативные изображения бактерий B. megaterium. (A) B. megaterium и (B) протопласта B. megaterium. Снимки были сделаны при 100-кратном ув.......

Материалы