$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Готовьте инструменты, питательные среды, растворы и чашки Петри
1. Автоклавируйте зубочистки в стакан объемом 50 мл, покрытый алюминиевой фольгой, чтобы сохранить их стерильными.
2. Стерилизуйте все сухие продукты, которые будут использоваться (типсы, палочки, стеклянная посуда и т.д.) в автоклаве.
ЗАМЕТКА: Осторожность! Следуйте всем указаниям по технике безопасности для используемой модели автоклава. Автоклавы представляют опасность взрыва, ожогов от пара и контакта с горячими поверхностями, материалами и средами.
3. Подготовьте MS агар (Mannitol Soy Flour (SFM)) для выращивания культур.
1. Добавьте в колбу объемом 1 л 5 г соевой муки и 5 г агара.
2. Растворите 5 г маннита в 250 мл водопроводной воды и раздайте в колбу с соевой мукой и агаром.
3. Добавьте поролоновую пробку и фольгу в отверстие колбы и автоклава при температуре 121 °C, 15 фунтов на квадратный дюйм не менее чем на 30 минут.
ОСТОРОЖНОСТЬ: Эта среда легко выкипает. Используйте колбу, которая может вместить как минимум в четыре раза больше фактического объема автоклавируемого агара MS. Стандартная скороварка может быть использована вместо автоклава с аналогичными соображениями безопасности. В качестве альтернативы микроволновая печь может использоваться для стерилизации сред и материалов, если доступ к автоклаву невозможен. Учителя старших классов также могут захотеть сотрудничать с местными колледжами или университетами, чтобы получить доступ к автоклавным материалам.
4. Охладите носитель до тех пор, пока с ним не будет удобно работать. Будьте осторожны, чтобы не охлаждать его слишком долго, потому что агар затвердевает при температуре ниже 50 °C.
5. Высыпьте MS агар из колбы в стерильные чашки Петри до тех пор, пока дно каждой чашки Петри не заполнится примерно наполовину (примерно 25 мл среды на чашку Петри). Дайте застыть перед использованием агаровых пластин. Храните агаровые пластины в полиэтиленовом пакете при комнатной температуре до тех пор, пока они не понадобятся.
ЗАМЕТКА: Тарелки с агаром также можно хранить в холодильнике, особенно если в среде нужны антибиотики.
2. Нанесите Streptomyces на пластины для размножения
1. Streak Streptomyces штаммирует на пластины MS-агара до одиночных колоний с помощью стандартного метода, такого как метод квадрантной полосы.
ЗАМЕТКА: Можно использовать петлю для прививки или стерильные зубочистки. Дополнительно: для видов Streptomyces обычно используются другие среды, такие как R2YE и минимальные среды.
2. Инкубируйте планшеты при температуре 30 °C.
3. Перестраивайте пластины, собирая одну колонию каждые 4–6 дней. По мере старения колонии становятся склонными к случайным мутациям.
3. Сравнение и запись внешнего вида
1. Обратите внимание на морфологию колонии для каждого мутанта по сравнению с родительским штаммом дикого типа после растрескивания всех штаммов, как в шаге 2. Сравнивайте новый изолят с изолятом хорошо изученных видов, таких как S. coelicolor или S. venezuelae, при описании новых видов Streptomyces . Обратите внимание на такие характеристики (рис. 1), как основная форма, поверхность колонии (нечеткая, лысая, морщинистая и т. д.), непрозрачность, возвышенность и пигментация (различайте вегетативный мицелий, воздушный мицелий и/или окружающую среду).
2. Пометьте агаровую пластину MS и рассейте штаммы дикого типа и мутантные штаммы клином (рис. 1). Будьте осторожны, чтобы ни один штамм не соприкасался с другим штаммом, чтобы избежать перекрестного загрязнения. Обратите внимание на дату и время, когда штаммы нанесены на пластину. Инкубируйте планшеты при температуре 30 °C.
3. Поместите выращенные чашки Петри на цветную или белую бумагу для гомогенизации фона. Напишите на бумаге название сорта, дату, температуру инкубации и время с момента первой полосы на планшете. Сделайте цифровую фотографию (фотографии) таблички с последней информацией, записанной на бумажном фоне, чтобы свести к минимуму путаницу.
ЗАМЕТКА: Надпись может быть вырезана из фотографии позже, если она будет использована для подготовки рисунка.
