Визуализация подвижности бактерий с использованием полутвердой среды с добавлением окислительно-восстановительного красителя

Аннотация

Источник: Чу, В., и Чжуан, Х. Визуализация бактериальной подвижности на основе цветовой реакции. J. Vis. Exp. (2022)

В этом видео демонстрируется анализ полутвердого агара на основе окислительно-восстановительного красителя для оценки подвижности бактерий путем визуального различения подвижных и неподвижных штаммов.

Протокол

Штаммы бактерий

ЗАМЕТКА: Восемьдесят штаммов были выделены из водной среды и идентифицированы с помощью автоматизированного инструмента идентификации бактерий (см. Таблицу материалов), включая Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella spp., Vibrio spp., Klebsiella pneumoniae и Aeromonas hydrophila (Таблица 1). Staphylococcus aureus (см. Таблицу материалов) использовали в качестве отрицательного неподвижного контроля; В качестве положительных контрольных штаммов использовали Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa и Salmonella typhimurium (см. Таблицу материалов).

1. Определите тестовые штаммы бактерий, которые будут использоваться для анализа подвижности.
2. Включайте штаммы отрицательного неподвижного контроля и штаммы положительного подвижного контроля.

Наблюдение за ТТС-усиленной подвижностью бактерий

1. Отоберите одиночные колонии тестовых бактерий из агаровых планшетов и инокулируйте их в полутвердую среду TTC (2,3,5-трифенилтетразолия хлорид) путем прокола их инокуляционными иглами.
2. Культивируйте пробирки при 37 °C в инкубаторе в течение 24-48 ч для наблюдения за результатами.
3. Наблюдайте за состоянием роста: охарактеризуйте бактерии как неподвижные (-), если только линия прокола красная. Характеризуйте бактерии как подвижные (+), если красный цвет слегка распространяется наружу вдоль линии прокола.

Таблица 1: Сравнение подвижности бактерий.

Напряжение		Полутвердая среда с 0,4% агара		Полутвердая среда с 0,4% агара и 0,005% TTC
		24 ч	48 ч	24 ч	48 ч
P. aeruginosa ATCC27853		+	+	+	+
Кишечная палочка ATCC25922		+	+	+	+
С. typhimurium ATCC14028		+	+	+	+
Золотистый S. aureus ATCC25923		-	-	-	-
Кишечная палочка (15)		12	14	13	14
Сальмонелла (8)		7	8	8	8
А. hydrophila (20)		18	20	20	20
Вибрион (8)		7	8	8	8
P. aeruginosa (24)		18	20	22	23
К. pneumoniae (5)		-5	-5	-5	-5
Цифрами обозначены номера положительных штаммов (+) и отрицательных красителей (-).

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Бакто-агар	Дифко
Кишечная палочка	АТКС	ATCC25922	Положительный контроль
Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa)	АТКС	ATCC27853	Положительный контроль
Золотистый стафилококк	АТКС	ATCC25923	Отрицательный неподвижный контроль
Триптоза	ОКСОИДНЫЙ
ТТХ (2,3,5-трифенил-тетразолия хлорид)	Сигма	298-96-4
Автоматизированная система идентификации микроорганизмов VITEK 2	Био Мерье