В этом видео демонстрируется колориметрический метод обнаружения деградации коры головного мозга во время прорастания бактериальных спор путем измерения высвобождения редуцирующих сахаров с течением времени. Используя стандарты N-ацетилглюкозамина и временные пробы, анализ количественно определяет концентрацию сахара с помощью фиолетовой хромогенной реакции, указывая на степень гидролиза коры.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Колориметрическое обнаружение деградации коры головного мозга при прорастании бактериальных спор
355 просмотров
⸱
26 сентября 2025 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
1. Цветной реагент
- Пока образцы находятся на льду, приготовьте цветной реактив. Растворите 0,320 г-диметиламинобензальдегида (DMAB; реактив Эрлиха) в 1,9 мл ледяной уксусной кислоты.
Заметка: Реагент чувствителен ко времени, температуре и свету и не должен производиться заранее. - После того как DMAB полностью растворится, добавьте 100 мкл 10 Н HCl и вортекс.
- Добавьте 5 мл ледяной уксусной кислоты и вортекс.
2. Колориметрическая реакция
- Переложите по 100 мкл каждого охлажденного образца коры головного мозга в новую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл.
- Добавьте в каждый образец по 700 μл свежеприготовленного цветового раствора.
- Немедленно перенесите образцы на водяную баню при температуре 37 °C и инкубируйте РОВНО 20 минут.
- Перелейте 200 мкл каждого образца в прозрачный 96-луночный планшет.
- Количественное определение образцов при длине волны 585 нм на планшетном риддере. Образцы должны начинаться с желтого цвета, а положительная реакция сместится на фиолетовый. Чем больше присутствует кора, тем глубже фиолетовый цвет.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Пробирка с завинчивающейся крышкой 2,0 мл | Научные США | 1420-3700 | |
| P1000 Eppendorf Pippet | Эппендорф | ||
| P200 Eppendorf Pippet | Эппендорф | ||
| P20 Eppendorf Pippet | Эппендорф | ||
| Наконечники для пипеток 100-1250 мкл | ВВР | 89079-486 | |
| 1-200 мкл наконечников для пипеток | ВВР | 89079-458 | |
| N-ацетил-D-глюкозамин | Сигма | А3286-25Г | |
| Ангидрид уксусной кислоты | Альфа Аэсар | Л04295 | |
| Бикарбонат натрия | BDH | BDH0280-500Г | |
| Тетраборат калия тетрагидрат | Альфа Аэсар | 39435 | |
| Гидроксид натрия | BDH | BDH8019-500Г | |
| 4-(Диметиламино)бензальдегид | Сигма | 156477-100Г | |
| СпектраМакс М3 | Молекулярные приборы | ||
| Уксусная кислота, ледяная | BDH | BDH3098-3.8LP | |
| Нагреваемая водяная баня с циркуляцией | VWR Scientific | Модель 1136 | |
| Микротест 96 | Сокол | 353072 | |
| Пробирки для культивирования | ВВР | 89000-506 | 96 хорошо прозрачных планшетов для культивирования тканей |
| Тепловые блоки | |||
| Вихревая машина | |||
