Микрофлюидное моделирование и флуоресцентное отслеживание роста бактерий в одиночных клетках

Abstract

Источник: Пиоли, Р., и др., Структурирование микроорганизмов и микрочастиц с помощью последовательной капиллярной сборки. J. Vis. Exp. (2021)

В этом видео демонстрируется метод захвата одиночных флуоресцентно меченых клеток Escherichia coli (E. coli) в микрофлюидных ловушках с использованием безуглеродной суспензии и контролируемого потока с последующим добавлением питательных веществ для запуска роста и флуоресцентной визуализацией микроколоний.

Protocol

1. Бактериальный рисунок

1. За день до эксперимента вырастите популяцию кишечной палочки (штамм MG1655 prpsM-GFP). Инокулируйте культуру непосредственно из замороженного сырья и выращивайте в течение ночи в течение 20 ч в среде лизогенного бульона (LB) в шейкерном инкубаторе при 37 °C. Добавьте 50 мкг/мл канамицина, чтобы клетки сохранили плазмиду prpsM-GFP (зеленый флуоресцентный белок).
2. В день эксперимента установите в инкубаторе коробку (рис. 1A) температуру 37 °C за несколько часов до начала эксперимента, чтобы обеспечить равномерную и стабильную температуру перед началом. Затем установите шприцевой насос и нагревательную стекля....

Results

Рисунок 1: Схема платформы для последовательной капиллярной сборки в микрофлюидном канале. (А) Инкубатор для ящиков. Коробчатый инкубатор поддерживает равномерную и постоянную температуру (в данном случае 30 °C) внутри микрофлюидного канала........

Materials