Подготовка культуры Streptococcus mitis для изучения взаимодействия хозяина и патогена

Аннотация

Источник: Naji, A., et al. Изучение окислительного стресса, вызванного стрептококками группы mitis у Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).

В этом видео демонстрируется метод культивирования Streptococcus mitis в микроаэрофильных условиях с использованием дрожжевого экстракта Тодда-Хьюитта, или агаровой среды THY, для подготовки бактериальных культур к исследованиям взаимодействия хозяина и патогена.

Протокол

1. Подготовка стрептококков группы Mitis к инфекции

1. Выделите нужные штаммы стрептококков на агаре размером 100 мм x 15 мм THY (Todd-Hewitt Yeast Extract) (если пластины хранились при 4 °C, предварительно прогрейте пластины до 37 °C перед нанесением соответствующих штаммов), затем инкубируйте пластины при 37 °C в течение ночи (~ 18 ч) в банке для свечей, обеспечив микроаэрофильную среду для роста стрептококков (пластины с прожилками можно хранить в течение недели при температуре 4 ° C).
2. Для размножения клинических изолятов стрептококков используют триптический агар соевой крови. Инкубируйте пластины при температуре 37 °C в банке для свечей на ночь (~18 часов).
3. На следующий день достаньте тарелки из банки со свечами и подберите изолированные колонии с помощью стерильной петли. Ввести 15 мл стерильных конических пробирок, содержащих 2 мл бульона THY. Для размножения клинических изолятов стрептококков добавляйте в бульон THY 5% v/v овечьей крови. Плотно закройте крышки и инкубируйте пробирки при температуре 37 °C в статических условиях.

Материалы