В этом видео демонстрируется сбор и обработка бронхоальвеолярной лаважной жидкости от усыпленной мыши, инфицированной нетипируемым Haemophilus influenzae , для последующего анализа.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Сбор бронхоальвеолярной лаважной жидкости у мышиной модели, инфицированной нетипируемой Haemophilus influenzae
1.4K просмотров
⸱
30 октября 2025 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
- Коллекция бронхоальвеолярных лаважных жидкостей (BALF)
- Принесите мышь в жертву при вывихе шейки матки через 24 часа после заражения.
- Анатомическими ножницами вскройте брюшную полость мыши, разрежьте вентральную аорту до кровотечения и обнажите вентральную часть легкого.
- Обнажите трахею и интубируйте ее с помощью катетера 20-го калибра. Закапайте 0,8 мл буфера BALF (1x PBS (фосфатно-солевой буфер), 0,1% декстрозы, 10 Ед/мл гепарина) и соберите промывание с помощью щадящей аспирации. Повторите эту процедуру три раза.
- Подсчитайте общее количество клеток в 100 μл суспензии BALF с помощью гемоцитометра при 10-кратном увеличении с окрашиванием Trypan Blue.
- Подготовьте предметные стекла для модифицированного окрашивания по Гимзе. Аликвот 100 мкл BALF в соответствующие лунки цитоспина и центрифуги при 500 х г в течение 5 мин. Высушите предметные стекла в течение 10 минут и окрасьте ячейки модифицированным морилкой Giemsa в соответствии с протоколами производителя.
- Оставшиеся клетки могут быть использованы для последующего анализа, такого как флуоресцентно-активируемая сортировка клеток (FACS), конфокальная микроскопия, экспрессия генов и вестерн-блоттинг.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Декстроза безводная | Темо Сайентифик | Р01300 | |
| Гепарин | Хоспира, Инк | РЛ-3010 | |
| Игла для шприца 20/26G | БД | (REF305115/175) | |
| 1 мл шприц | БД | ССЫЛКА 309602 | |
| Катетер 20GA | БД | ССЫЛКА 381433 | |
| Пинцет #5 Нержавеющая сталь, длина 11см | Кентнаучный | INS600095 | |
| 5 мл Полистирольные тубы с круглым дном | БД | ССЫЛКА 352058 | |
| Микроцентрифужные пробирки 1,5 мл | Световые лаборатории | А-7001-Р | |
| 1X PBS (фосфатно-солевой буфер) | Gibco | 10010-023 | |
| Буфер для лизиса эритроцитов (10X) | Биолегенда | 420301 |
Теги
