Оценка частоты мутаций у бактерий с помощью анализа на бета-глюкозидазу

Abstract

Источник: Stefan, A., et al. Многогранные преимущества совместной экспрессии белка в кишечной палочке. J. Vis. Exp. (96), (2015).

В этом видео показана оценка частоты мутаций у бактерий с помощью анализа бета-глюкозидазы. Бактериальные культуры, экспрессирующие ДНК-полимеразу, испытывающую дефицит корректуры, собираются в течение последующих поколений. Ошибки репликации, вызванные сокращением корректуры, могут активировать подавленный ген бета-глюкозидазы. После центрифугирования и пермеабилизации добавляют субстрат и измеряют активность фермента для количественной оценки частоты мутаций в образцах.

Protocol

1. Выделение котрансформантов Escherichia coli или E. coli

1. Подготовьте электрокомпетентные клетки соответствующего штамма кишечной палочки для трансформации. Перенесите в 1 мл среды Luria-Bertani (LB) (триптон, экстракт дрожжей, хлорид натрия или NaCl в концентрации 10, 5 и 10 г/л соответственно) одну колонию выбранного штамма и инкубируйте при 37 °C при встряхивании 180 об/мин. Разведите предварительную культуру в соотношении 1:500 в 25 мл свежей среды LB и инкубируйте культуру при 37 °C.
2. В логарифмической фазе (0,6 O.D.) центрифугируют клеточную суспензию при 500....

Materials