Подвижность скольжения у нитей Phormidium lacuna

Аннотация

Источник: Weber, N., et al., Natural Transformation, Protein Expression, and Cryoconservation of the Filamentous Cyanobacterium Phormidium lacuna. J. Vis. Exp. (2022)

В этом видео показана процедура оценки подвижности скольжения в Phormidium lacuna путем гомогенизации филаментных культур для создания однородной суспензии, подготовки установки для анализа на пластине Петри на предметном стекле микроскопа и визуализации движения филамента.

Протокол

1. Проба на движение в жидкой среде
   1. Для непосредственного наблюдения за моторикой перелейте 8 мл среды, содержащей P. lacuna, в чашку Петри диаметром 6 см. Подождите несколько минут, пока образец достигнет комнатной температуры, затем накройте чашку Петри целлофановой фольгой.
   2. Поместите предметное стекло микроскопа на x-y стол стандартного микроскопа с камерой. Включите свет микроскопа. В идеале всегда используйте одни и те же электрические и оптические настройки для освещения. Переместите объектив с 4-кратным или 10-кратным увеличением на путь света.
   3. Поместите чашку Петри на горку. Отрегулируйте отдельные нити накаливания или пучки нитей путем движений стола по осям x, y и z.
      ЗАМЕТКА: Благодаря трехмерному расположению в фокусе может быть только часть соответствующего раздела. Целлофановая фольга позволяет регулировать фокус без ограничений.
   4. Наблюдайте за движениями отдельных нитей или пучков. Следите за тем, чтобы линза объектива не соприкасалась с жидкостью. Записывайте движения нитей с помощью стандартной камеры микроскопа.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Стеклянная посуда разная
Микроскоп DM750	Цейсс
Окулярная камера MikrOkular Full HD	Брессер		для цейтраферной записи, подключенный к миникомпьютеру Raspberry Pi
Чашки Петри из полистирола, 60 мм x 15 мм	Мерк	П5481-500ЭА
Программное обеспечение, URL
ИзображениеJ		программное обеспечение для обработки иммага (интенсивность пикселей, диаметр круга)
Питательные среды
Искусственная морская вода	0,41 М NaCl, 53 мМ MgCl₂, 28 мМ Na₂SO₄, 10 мМ CaCl₂, 9 мМ KCl, 2,4 мМ NaHCO₃ ,0,84 мМ KBr, 0,49 мМ H3BO₃, 90 мкМ SrCl₂, 72 мкМ NaF
f/2 -жидкая среда	искусственная морская вода, 0,1 % (v/v) раствор микроэлемента, 0,05 % (v/v) витаминный раствор, 0,88 мМ NaNO₃, 36 мкМ₂PO₄
Раствор микроэлементов	0,36 мМ₂PO₄, 12 мкМ Na₂EDTA, 39 нМ CuSO₄, 26 нМ Na₂MoO₄, 77 нМ ZnSO₄, 42 нМ CoCl₂, 0,91 мкМ MnCl₂
Витаминный раствор	0,3 мкМ тиамина-HCl, 2,1 нМ биотин, 0,37 нМ цианокобаламин