Гистологические и гематологические анализы для оценки эффекта Bacillus subtilis на крыс, испытывающих тепловой нагрузка

Аннотация

Источник: Сорокулова, И., и др. Профилактика побочных эффектов теплового стресса у крыс со стороны штамма Bacillus subtilis. J. Vis. Exp. (2016)

В этом видео представлены гистологические и микроскопические анализы крови, используемые для оценки защитного эффекта Bacillus subtilis у крыс, подвергшихся тепловому стрессу.

Протокол

1. Гистологический анализ

1. Удалить образцы тонкого кишечника у каждой экспериментальной крысы хирургическим вмешательством. Фиксируйте образцы в фиксаторе Буэна, внедрите в парафин, подготовьте срезы диаметром 6 мкм и окрашивайте срезы гематоксилином и эозином по стандартным процедурам.
2. Используйте высокоразрешающую микроскопическую систему для измерения высоты ворсинок кишечника и общей толщины слизистой в каждом образце (увеличение 100 раз). Проанализируйте по 4 образца каждой крысы и проведите не менее двадцати измерений в каждом образце. Экспресс показывает микрометры.

2. Высокоразрешающая световая микроскопия крови

1. Используйте платформу для вибрационной изоляции в качестве основы для микроскопической системы, а также видеокамеры и компьютера для записи живых изображений. Калибруйте тестовые изображения с помощью слайда Ричардсона.
2. Разместите 7 мкл свежевзятой крови каждой крысы на стеклянный слайд, на обложку, сфотографируйте и запишите десять кадров размером 72 × 53,3 мкм² в каждый образец (увеличение 1 700 раз).
3. Измеряйте концентрацию везикул с помощью программного обеспечения, которое предоставляет высокое разрешение с прямым видом оптических изображений в реальном времени. Изучите минимум 20 кадров изображения для каждого экспериментального состояния.

Материалы