Получение чистых бактериальных культур в жидкой среде

Аннотация

Источник: Brumfield, K. D. и др., Лабораторные методы, используемые для поддержания и дифференцирования биотипов клинических и экологических изолятов Vibrio cholerae . J. Vis. Exp . (2017)

В этом видео демонстрируется рост бактериальных культур в жидкой среде. Встряхивание способствует аэрации и равномерно распределяет питательные вещества, поддерживая экспоненциальный рост и создавая равномерную, метаболически активную суспензию, подходящую для последующих применений.

Протокол

1. Поддержание и рост штаммов Vibrio cholerae

1. Приготовление и использование замороженных культур
   1. Гранулировать 1,8 мл жидкой культуры за ночь в течение 2 минут путём центрифугирования (≥8 600 x g) в стерильной трубке микроцентрифуги объемом 2 мл, удалять супернатант и восстанавливать клеточную гранулу в 900 мкл свежего бульона Лурия-Бертани (LB) с помощью пипетирования.
   2. Добавьте 900 мкл стерильного глицерила 60% (v/v) в культуру и смешайте путём вихря.
   3. Переведите смесь в стерильную криогенную трубку объемом 2 мл и храните бесконечно при -80 °C.
   4. Для использования удалите небольшое количество замороженного бульона с помощью стерильной инокуляционной петли и полоски для отдельных колоний на пластинах LB агар. Сразу же возвращайте замороженный бульон до -80 °C после использования, чтобы предотвратить полное оттаивание посевов. Инкубировать тарелки крышкой вниз в течение 12–16 часов при 37 °C.
2. Рост ночных культур в жидкой среде
   1. Полоса для одиночных колоний (согласно разделу 1.1.4) от замороженного запаса на пластины ЛБ агар. Инкубировать тарелки крышкой вниз в течение 12–16 часов при 37 °C.
   2. Инокуляция 4 мл жидкого бульона LB в стерильную 10-мл культурную трубку с одной колонией, коснувшись поверхности одной колонии стерильной палочкой аппликатора и переливая её в жидкий бульон.
   3. Инкубировать с аэрацией в шейкерном инкубаторе со скоростью 225 оборотов в минуту (об/мин) в течение 12–16 часов при 37 °C.

Материалы