Анализ подвижности для сравнения штаммов Vibrio cholerae с использованием хлорида трифенилтетразолия

Аннотация

Источник: Brumfield, K. D. и др. Лабораторные методы, используемые для поддержания и дифференцировки биотипов клинических и экологических изолятов Vibrio cholerae . J. Vis. Exp . (2017)

В этом видео демонстрируется мягкий агарный анализ с использованием хлорида трифенилтетразолия для оценки и сравнения подвижности штаммов Vibrio cholerae , визуализируя метаболическую активность через формирование красной зоны вокруг активно мигрирующих клеток.

Протокол

1. Анализ подвижности
   1. Приготовьте ночную культуру сортов Vibrio cholerae в жидком бульоне LB (Luria-Bertani).
   2. Пеллет 1,8 мл ночной культуры в течение 2 минут центрифугой (≥8 600 x г) в стерильной микроцентрифугной трубке объемом 2 мл и удаляем надценительный материал с помощью пипетки. Ресуспензировать клеточную гранулу в 1,8 мл 1x PBS (фосфатно-буферный физиологический раствор) с помощью пипетирования.
   3. Повторить процедуру промывания три раза, затем окончательное повторное подвесление в 1,8 мл 1x PBS.
   4. Инокуляция агарных пластин моторики, вставляя инокуляционный удар в промытую жидкую культуру и вертикально вбивая в среду. Между каждой прививкой стерилизуйте проволочный удар с помощью горелки Бунзена, а при уколе агара следите, чтобы укол не сгибался — это может повлиять на результат.
   5. Инкубировать тарелки крышкой вверх в течение 14–24 часов при 37 °C. Через 14 часов внимательно следите за пластинами подвижности, чтобы предотвратить чрезмерный рост культур.

Материалы