Анализ Вогеса-Проскауэра для дифференцировки биотипов холеры Vibrio

Аннотация

Источник: Brumfield, K. D. и др., Лабораторные методы, используемые для поддержания и дифференцирования биотипов клинических и экологических изолятов Vibrio cholerae . J. Vis. Exp .(2017).

В этом видео демонстрируется тест Вогеса-Проскауэра (VP) для различия между тремя биотипами холеры Vibrio: классический, дикий тип Эль Тор и вариант Эль Тор. Каждая культура инокуляется в глюкозосодержащую среду, инкубируется и обрабатывается α-нафтолом и гидроксидом калия для обнаружения наличия ацетоина. Розовато-красный цвет, указывающий на положительную реакцию VP, наблюдается только у дикого типа биотипа Эль Тор, что отличает его от классических и вариантных типов.

Протокол

Voges-Proskauer (VP) анализ

1. Подготовьте ночной культуры(ы) в жидком бульоне LB.
2. Инокуляция 4 мл метил-красного бульона Voges-Proskauer, или MR-VP, пипетируя 10 мкл предварительно приготовленной ночной культуры в 4 мл бульона MR-VP в стерильной культурной трубке и инкубировать с аэрацией в шейкер-инкубаторе при 225 об/мин в течение 12–16 часов при 37 °C.
3. Добавьте 150 мкл 5% (w/v) α-нафтол и 50 мкл 40% (в/в) KOH к 1 мл аликвот ночной культуры MR-VP в стерильных пробирках соответственно.
4. Кратковременно выхрите и дайте постоять при комнатной температуре до 4 часов, пока не произойдёт изменение цвета.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
MR-VP Бульон	Difco	216300	http://catalog.bd.com/nexus-ecat/getProductDetail?productId=216300&parentCategory=&parentCategoryName=&categoryId=&categoryName=&searchUrl=%2FsearchResults%3Fkeyword%3Dmr-vp%2Bmedium%26typeOfSearch%3DproductSearch
КО	Fisher Scientific	P250-500	https://www.fishersci.com/shop/products/potassium-hydroxide-pellets-certified-acs-fisher-chemical-5/p250500?searchHijack=true&searchTerm=P250500&searchType=RAPID
α-наптол	MP Biomedicals	204189	http://www.mpbio.com/product.php?pid=05204189