Скрининг морских бактерий для выделения штамм, разрушающих загрязняющие вещества

Аннотация

Источник: Виллела, Х. Д. М . и др .Поиск микробных штаммов для биоремедиации и разработки пробиотиков для исследований и сохранения метаорганизмов. J. Vis. Exp .(2019).

Это видео демонстрирует выделение морских бактерий, разрушающих загрязняющие вещества, посредством серийного разбавления, отбора колоний и роста в среде, содержащей EE2. Используя EE2 как единственный источник углерода, протокол выявляет бактериальные штаммы, способные метаболизировать этот загрязнитель окружающей среды.

Протокол

1. Сбор и хранение воды и кораллов для микробной изоляции

ЗАМЕТКА: Важно учитывать координаты и температуру мест отбора проб. Если возможно, метаданные, такие как солёность, pH, глубина и интенсивность света, также могут помочь в поиске тонко отточенных подходов к культивации и будущей интерпретации данных. Для надёжных результатов храните образцы максимально возможного времени. Микробиомы воды и кораллов могут значительно измениться, если образцы хранятся при правильной температуре и/или хранятся длительное время. Если этап изоляции не выполняется мгновенно после сбора, крайне важно поддерживать образцы при температуре 4 °C до обработки. Чем дольше....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Бутылка для хранения носителей PYREX объемом 500 мл	Томас Сайентифик/Корнинг	1743E20/1395-500	Используется для проб воды.
Аспираторные бутылки объемом 500 мл	Томас Сайентифик/Корнинг	1234B28/1220-2X	Используется для разделения нефтяных долей.
Плоскогубцы для резки проволоки диаметром 6 дюймов	Томас Сайентифик/Рестек	1173Y64/23033	Используется для вырезания фрагментов кораллов.
17a-этинилестрадиол	Стандарты LGC	DRE-C13245100	Используется как единственный источник углерода для производства селективных сред.
Агар	Himedia	PCT0901-1KG	Использовался для производства твёрдых носителей.
Бульон Бушнелл Хаас	Himedia	M350-500G	Используется как минимальная среда для дополнения источниками углерода.
Колба Эрленмайера	Томас Сайентифик/DWK Life Sciences (Кимбл)	4882H35/26500-125	Используется для инкубации коралловой мацерации стеклянными бусинами.
Бульон Лурия Бертани, Миллер (Бульон Миллер Луриа Бертани)	Himedia	M1245-1KG	Используется как богатая среда для выращивания бактерий.
Marine Agar 2216 (Zobell Marine Agar)	Himedia	M384-500G	Используется как богатая среда для выращивания бактерий.
Орбитальный встряхивающий инкубатор			Используется для инкубации жидких среды и масла.
Инкубатор пластин			Используется для инкубации тарелок.
Фарфоровая ступка с пестиком	Томас научный/United Scientific Supplies	1201U69/JMD150	Используется для мацерации фрагментов кораллов.
Флюорметр Кубит 2.0	Инвитроген		Используется для количественной оценки нуклеиновых кислот ДНК и продуктов ПЦР.
Рефрижераторная центрифуга			Используется для центрифуг бактериальных культур.
Спектрофотометр			Используется для измерения оптической плотности бактериальных культур.