Оценка подвижности бактерий с помощью микрофлюидного устройства

Abstract

Источник: Scheidweiler, D. и др. Сочетание жидких устройств с микроскопией и потоковой цитометрией для изучения микробного транспорта в пористых средах на разных пространственных масштабах. J. Vis. Exp. (2020).

В этом видео демонстрируется использование микрофлюидного устройства для количественной оценки подвижности бактерий через пористую матрицу, состоящую из случайно расположенных столбов. Флуоресцентно маркированные бактерии вводятся в устройство, визуализируются с помощью микроскопии по мере их движения через пористую матрицу в наблюдательный канал и анализируются для получения прорывной кривой (BTC).

Protocol

1. Условия бактериального посева.

1. Работая под ламинарным вытяжкой, используйте 100 мкл глицерилового запаса зелёного флуоресцентного белка ( GFP) Pseudomonas putida KT2440 (1 × 10^{7 мл-1}, хранящегося при -80 °C) для инокуляции 5 мл среды Luria-Bertani (LB). Инкубировать при 30 °C при встряхивании при 250 об/мин ночью.
2. На следующий день повторно суспендировать 100 мкл ночной культуры в среде 5 мл LB и инкубировать в тех же условиях в течение 5 часов (экспоненциальная фаза). Возьмите пробу из аликвота объёмом 1 мл в трубку на 2 мл, дайте остыть до комнатной температуры (~15 мин) и центрифугу (2300 x г на 5 минут).

Results

Рисунок 1: Флюидные устройства для изучения микробного транспорта в пористых средах (A) Иллюстрация флюидного устройства, измельчённого из поли(метилметакрилата (PMMA). Пористая матрица фрезеруется в базовый слой устройства, а крышка закрыв.......

Materials