Долгосрочное криоконсервирование штаммов цианобактерий с использованием глицерина или диметилсульфоксида

Аннотация

Источник: Lea-Smith, D. J. и др. Генерация отмеченных и безмаркерных мутантов в модельных видах цианобактерий. J. Vis. Exp . (2016)

В этом видео демонстрируется криоконсервация штаммов цианобактерий путём сочетания концентрированных клеточных суспензий с глицерилом или DMSO и их хранения при низких температурах, что позволяет долгосрочно поддерживать жизнеспособные культуры для фотосинтеза и генетических исследований.

Протокол

1. Подготовка культурных медиа

1. Подготовьте средний материал BG11
   1. Подготовьте прикладные растворы из 100x BG11, микроэлементов и железного приклада (Таблица 1).
   2. Подготовьте отдельные растворы фосфатного запаса, буфера азота натрия (_{Na 2}CO₃) N-[Tris(гидроксиметил)метил] -2-аминоэтансульфоновая кислота (TES) и бикарбоната натрия (_{NaHCO 3}) (Таблица 1).
   3. Автоклав фосфатов и запасов Na₂CO₃ . Фильтруйте-стерилизуйте буфер TES и_{NaHCO 3} с фильтрами 0,2 мкм.
   4. Приготовьте BG11, смешав 976 мл воды, 10 мл 100x BG11, 1 мл мик....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
NaNO₃	Сигма	S5506
MgSO₄·7H₂O	Сигма	230391
CaCl₂	Сигма	C1016
Лимонная кислота	Сигма	C0759
Na₂EDTA	Рыбак	EDT002
H₃BO₃	Сигма	339067
MnCl₂·4H₂O	Сигма	M3634
ZnSO₄·7H₂O	Сигма	Z4750
Na₂MoO₄·2H₂O	Сигма	331058
CuSO₄·5H₂O	Сигма	209198
Co(NO₃)₂·6H₂O	Сигма	239267
Цитрат железного аммония	Сигма	F5879
K₂HPO	Сигма	P3786
Na₂CO₃	Рыбак	SODC001
TES	Сигма	T1375
NaHCO₃	Рыбак	SODH001
HEPES	Сигма	H3375
Цианокобаламин	Сигма	47869
Na₂S₂O₃	Сигма	72049
Бакто агар	BD	214010
Сахароза	Рыбак	SUC001
Чашка Петри 90 мм с тройной вентиляцией	Грейнер	633185
0,2 мкм фильтры	Сарториус	16534
Конические колбы объемом 100 мл	Пирекс	CON004
Parafilm M 100 мм x 38 м	Бемис	FIL003
Полимераза высокой точности ДНК Фузиона	Фьюзион	F-530
Агароза	Мелфорд	MB1200
Набор для очистки ДНК	MoBio	12100-300
Рестрикционные эндонуклеазы	КЛЮВ
Лигаза T4	Thermo Scientific	EL0011
Бульон Лурия Бертани	Инвитроген	12795-027
МЧС	Сигма	M8250
Канамицинсульфат	Сигма	60615
Ампициллин	Сигма	A9518
Минипреп-комплект GeneJET для плазмиды	Thermo Scientific	K0503
Трубка с круглым дном объемом 14 мл	BD Falcon	352059
Гибкая ДНК-полимераза GoTaq G2	Promega	M7805
Стеклянные бусины диаметром 425–600 мкм	Сигма	G8772
Глицерин	Сигма	G5516
ДМСО	Сигма	D8418
Люминесцентные лампы	Гро-Люкс	69
Мультитронный фотобиореактор HT	Инфомеры