В этом видео демонстрируется процедура флуоресцентной гибридизации in situ (FISH) для окрашивания микробиоты кишечника в тканях кишечника мышей путём гибридизации флуоресцентных зондов с бактериальной рРНК (рибосомной рибонуклеиновой кислоты) и контрокрашивания структур хозяина для микроскопического анализа.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Флуоресценция in situ гибридизация кишечных бактерий в срезах кишечника мышей
642 просмотров
⸱
30 января 2026 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этической экспертизе животных
- Бактериальное окрашивание с помощью FISH (флуоресцентная гибридизация in situ)
- Используйте блокатор жидкости или PAP-ручку (гидрофобное барьерное перо), чтобы ограничить площадь расширения жидкости, обводя область каждого среза ткани. Убедитесь, что чернила не соприкасаются с самим разделом. Создайте круг как можно ближе к каждому срезу ткани, не соприкасаясь с тканью, чтобы минимизировать площадь поверхности, которую необходимо покрыть раствором гибридизации.
- Подготовьте раствор для гибридизации: н....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Банка Коплина | Фишер | 08-813E | |
| Стекло на крышке, 22 × 22 мм, нет #1 | VWR | CA48366-227-1 | |
| DAPI | Сигма-Олдрич | D9542 | Восстановили дозу до 5 мг/мл |
| Пустой ящик для наконечников пипетки | Чтобы расплавить парафин | ||
| Зонды FISH | |||
| Решение для гибридизации FISH | -- | -- | pH 20 мМ Tris–HCl 7,4, 0,9 млн NaCl, 0,01% (с в/в) SDS в воде без нуклеазы. Опциональное добавление формамида 5–50% (v/v) |
| Буфер для мытья рыб | -- | -- | pH 20 мМ Tris–HCl 7,4, 0,9 млн NaCl |
| Флуоресцентно маркированный лектин Ulex Europaeus Agglutinin (UEA-1) | Vector Laboratories | FL-1061 (с меткой флуоресцеина) или RL-1062-2 (с меткой родамина) | UEA-1 маркирует фукозилированные гликаны, поэтому он не подходит для мышей без микробов или для образцов хозяев с дефицитом фукозилтрансферазы 2 (FUT2). |
| Щипцы | |||
| Гибкие пластиковые накладки HybriSlip, 22 x 22 мм × 0,25 мм | Сигма Олдрич | GBL722222 | для этапов гибридизации FISH можно заменить стеклянные покрытия |
| ImmEdge Hydrophobic Barrier PAP Pen | Vector Laboratories | H-4000 | |
| Кимвайпс | |||
| Многофункциональные контейнеры для хранения образцов, 473 мл | Фишер | 14-955-117A | Можно заменить на стеклянную или полиэтиленовую ёмкость по своему выбору. Метакарн несовместим с полистиролом или металлом. |
| Лак для ногтей | Науки об электронной микроскопии | 72180 | Любой лак для ногтей должен подойти |
| Духовка | Необходимый диапазон: 45-60 °C | ||
| PBS, фосфатно-буферный физиологический раствор (раствор 10x) | Фишер | BP3991 | Разведите до 1x для протокола |
| Хлорид натрия | Фишер | S271 | |
| Раствор гидрохлорида Тризмы, 1M Tris-HCl, pH 7,4 | Сигма-Олдрич | T2663-1L | |
| Вода, без нуклеаз | Фишер | BP2484100 |
