Количественная оценка бактериального выделения для оценки потенциала передачи инфекции у дрозофилы

Аннотация

Источник: Siva-Jothy, J. A. и др., Бактериальная инфекция и выпадение у Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео демонстрируется процедура мониторинга выпадения бактерий у Drosophila путём перемещения инфицированной мухи через несколько пробирок с пищевыми трубками, восстановления выброшенных бактерий и количественного определения жизнеспособных колоний посредством серийного разведения и покрытия.

Протокол

1. Измеряйте выпадение бактерий
   1. Измеряйте выпадение вместе с внутренней нагрузкой.
   2. После заражения переместите одиночных мух в микроцентрифугные трубки объёмом 1,5 мл с ~50 мкл среды Льюиса в течение 24 часов.
   3. Удалите мушки для внутреннего измерения нагрузки и промыйте трубки 100 мкл 1x PBS (фосфатно-буферный физиологический раствор), интенсивно вихря в течение 3 секунд.
   4. Измеряйте CFU (колониообразующие единицы) в этом растворе, покрывая LB (Luria-Bertani) агаром питательных веществ.
   5. После заражения переместите одиночных мух в микроцентрифугные трубки объёмом 1,5 мл с ~50 мкл среды Льюиса в течение 24 часов.
   6. Переместить мух в новые микроцентрифугные трубки с ~50 мкл среды Льюиса ещё на 24 часа. Промыйте загрязнённые трубки 100 мкл 1x PBS, сильно вихря в течение 3 секунд.
   7. Измеряйте количество CFU в этом промывке, покрывая LB питательным агаром.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Флаконы	Sarstedt Ltd.	58.49	Полистироловая трубка с плоским основанием 75 мм x 23,5 мм, 23 мл
Агар	Сигма-Олдрич	A7002	Агар, пепел 2,0-4,5%
Коричневый сахар	Bidvest	66032	Светло-коричневый мягкий сахар
Кукуруза	Ферма Голуби		Органическая кукурузная мука
Дрожжи фермипан	Bidvest	96360	Сухие, мгновенные дрожжи
Чашки Петри	Fisher Scientific UK Ltd.	15788517	X600 Чашка Петри 90 x 16,2 мм стерильный тройной вентиляционный отверстие
Трубка Эппендорфа (1,5 мл)	Sarstedt Ltd.	72.690.001	Sarstedt Micro Tube с коническим основанием 1,5 мл Стандартная нейтральная
Этанол	VWR International Ltd.	20821.33	ETHANOL ABSOLUTE ANALAR NP ACS/R.PE - Аналитический класс
LB бульон, Миллер	Fisher Scientific UK Ltd.	BP1426	Содержит 10 г триптона, 5 г экстракта дрожжей, 10 г хлорида натрия на литр
96-ячественная микропластина	Научно-лабораторное оборудование Лтд.	353072	Falcon 96 Well Clear Flat Bottom Flat Bottom, обработанная TC-обработанной полистироловой клеточной микропластинкой с стерильной крышкой
Вихрь	Фишербранд		Whirlimixer 75W 50-6-Hz 220-240V
10 мкл наконечников пипетов	Greiner Bio-one Inc	741015	Easlyload в стиле Gilson. Дипломировано, чисто, пополнение, 960 штук
200 мкл наконечников Pipette	Greiner Bio-one Inc	741065	Easlyload в стиле Gilson. Дипломировано, чисто, пополнение, 960 штук
1000 мкл наконечников пипетов	Greiner Bio-one Inc	741045	Easlyload в стиле Gilson. Дипломировано, чисто, пополнение, 960 штук
20 мкл фильтрованных наконечников пипеток	Greiner Bio-one Inc	774288	Фильтрующий наконечник в стиле Гилсона. Прозрачный, синий в стойке, упакован в одиночку, без R/Dnase, 10 стоек по 96 штук
200 мкл Фильтрованные наконечники пипеток	Greiner Bio-one Inc	739288	Фильтрующий наконечник в стиле Гилсона. Прозрачный, синий в стойке, упакован в одиночку, без R/Dnase, 10 стоек по 96 штук
1000 мкл фильтрованных наконечников пипеток	Greiner Bio-one Inc	740288	Фильтрующий наконечник в стиле Гилсона. Прозрачные, синие в стойке, упакованные в одиночку, без R/Dnase, 10 стоек по 60 штук