$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
1. Инокуляция Pseudomonas aeruginosa
- Разбавить за ночь культуру PAO1:lux доOD 600 = 0,05 в 75 мл среды бульона Лизогенез (LB), содержащей 100 мкг/мл карбенициллина, и вырастить бактерии до ранней экспоненциальной фазы (OD 600≈0,3). Это займет примерно 2–3 часа.
- Разбавите PAO1:lux в фосфатно-буферном физиологическом растворе (PBS) до концентрации (7,5 ± 2,5) x 102 CFU/mL. Обязательно подготовьте избыточный инокулюм, чтобы обеспечить достаточный объём и позволить сервовать после эксперимента. При транспортировке между объектами используйте двойную изоляцию в герметичной коробке с чёткой маркировкой «Биологическая опасность».
- Выполнять все работы с P. aeruginosa и мышами с использованием одобренных средств индивидуальной защиты в биологическом шкафе для биологической безопасности (BSC) уровня биобезопасности для животных уровня 2 (ABSL-2). Многоразовое оборудование, такое как весы, должно быть покрыто пищевой пленкой для предотвращения загрязнения.
- Анестезиируйте мышь с помощью 3% изофлурана. Взвесьте мышь и запишите вес. Введите мыши подкожно предварительно нагретый стерильный хлорид натрия 0,9%, по 250 мкл на каждую сторону, всего 500 мкл.
- Если прозрачная плёнка с мыши снялась за ночь, аккуратно удалите остатки корки и нанесите новую повязку.
- Используйте 500 мкл туберкулинового защитного шприца 27 G, чтобы ввести 40 мкл суспензии PAO1:lux через прозрачную плёнку в каждую рану. Для неинокуляций/PBS-контроля ран следует использовать разные мыши, чтобы предотвратить перекрёстное загрязнение с противоположной стороны.
- Положите мышь обратно в клетку на грелку и следите за её вниманием, пока она не проснётся. Всех мышей следует содержать по отдельности в отдельных клетках, чтобы предотвратить перекрёстное загрязнение.
- Дайте высококалорийную пищевую пасту, зажатую между пищевыми гранулами на полу клетки.