Разработка мышиной модели хронической кожной рановой инфекции Pseudomonas aeruginosa

Аннотация

Источник: де Врис, К. Р., et.al. Отсроченная модель прививки при хронической инфекции раны Pseudomonas aeruginosa . J. Vis. Exp . (2020)

В этом видео демонстрируется задержка инокуляции люминесцентной Pseudomonas aeruginosa мыши с двумя полноразмерными спинными ранами на коже, покрытыми прозрачной плёнкой. Это способствует формированию биоплёнки и формированию хронической инфекции. Регулярный мониторинг биолюминесценции позволяет количественно оценивать нагрузку бактерий и отслеживать прогрессирование инфекции со временем.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Инокуляция Pseudomonas aeruginosa

1. Разбавить за ночь культуру PAO1:lux до_{OD 600} = 0,05 в 75 мл среды бульона Лизогенез (LB), содержащей 100 мкг/мл карбенициллина, и вырастить бактерии до ранней экспоненциальной фазы (_{OD 600}≈0,3). Это займет примерно 2–3 часа.
2. Разбавите PAO1:lux в фосфатно-буферном физиологическом растворе (PBS) до концентрации (7,5 ± 2,5) x 10² CFU/mL. Обязательно подготовьте избыточный инокулюм, чтобы обеспечить достаточный объём и позволить сервовать после эксперимента. При транспортировке между объектами используйте двойную изоляцию в герметичной коробке с чёткой маркировкой «Биологическая опасность».
3. Выполнять все работы с P. aeruginosa и мышами с использованием одобренных средств индивидуальной защиты в биологическом шкафе для биологической безопасности (BSC) уровня биобезопасности для животных уровня 2 (ABSL-2). Многоразовое оборудование, такое как весы, должно быть покрыто пищевой пленкой для предотвращения загрязнения.
4. Анестезиируйте мышь с помощью 3% изофлурана. Взвесьте мышь и запишите вес. Введите мыши подкожно предварительно нагретый стерильный хлорид натрия 0,9%, по 250 мкл на каждую сторону, всего 500 мкл.
5. Если прозрачная плёнка с мыши снялась за ночь, аккуратно удалите остатки корки и нанесите новую повязку.
6. Используйте 500 мкл туберкулинового защитного шприца 27 G, чтобы ввести 40 мкл суспензии PAO1:lux через прозрачную плёнку в каждую рану. Для неинокуляций/PBS-контроля ран следует использовать разные мыши, чтобы предотвратить перекрёстное загрязнение с противоположной стороны.
7. Положите мышь обратно в клетку на грелку и следите за её вниманием, пока она не проснётся. Всех мышей следует содержать по отдельности в отдельных клетках, чтобы предотвратить перекрёстное загрязнение.
8. Дайте высококалорийную пищевую пасту, зажатую между пищевыми гранулами на полу клетки.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
0,9% инъекция хлорида натрия	Hospira	2484457
Самцы мышей C57BL/6J	Лаборатория Джексона	664
Фосфатно-буферный физиологический раствор (PBS) 1 раз	Корнинг	21-040-CV
Пресс и герметизация пищевой пленки	Рад	н/д
Инсулиновый шприц Safetyglide, 1/2 мл, 30 г x 5/16 ТВт	BD	305934
Масштаб	Ohaus Scout Pro	SP202
Пищевая добавка	Henry Schein Animal Health	29908