Методическая статья

Коинфильтрационный анализ для скрининга эффекторов патогенов, подавляющих заглушание РНК растений

30 января 2026 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Ши, Дж . и др. Скрининг и идентификация РНК-подавляющих супрессоров из секретируемых эффекторов патогенов растений. J. Vis. Exp . (2020)

В этом видео демонстрируется коинфильтрационный анализ для выявления эффекторных белков патогена, подавляющих заглушание РНК у Nicotiana benthamiana 16c. Флуоресцентный репортер и кандидат-эффекторный ген вводятся в листья растений с помощью Agrobacterium. Обычно заглушание РНК разрушает репортерные транскрипты, снижая флуоресценцию. Супрессорные эффекторы блокируют этот ответ, сохраняя флуоресценцию. Этот анализ предлагает быстрый визуальный метод скрининга микробных эффекторов, мешающих защите хозяина.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Совместная инфильтрация Nicotiana benthamianлистья

  1. Смешайте равные объемы культуры Agrobacterium с 35S-GFP с культурой Agrobacterium , содержащей 35S-огуречный мозаичный вирусный супрессор 2b (CMV2b), предполагаемый эффектор или пустой вектор (EV).
  2. Осторожно и медленно инфильтруйте смешанные суспензии агробактерий на абаксиальных сторонах листьев N. benthamiana 16c с помощью безиглового шприца объёмом 1 мл.
  3. Удалите оставшуюся бактериальную суспензию с листьев с помощью мягкоочистителей и обведите края инфильтрированных участков ручкой-мейкером.
  4. Оставьте инфильтрированные растения в камере роста при тех же условиях роста.

    ПРИМЕЧАНИЕ: По соображениям безопасности и здоровья при проникновении следует носить защитные очки и маску. Чтобы предотвратить перекрёстное загрязнение, перчатки следует менять или стерилизовать этанолом между инфильтрациями. Обычно для инфильтрации требуется не менее 1 мл суспензии агробактерии на каждый лист. Для системного подавления потребуется как минимум два листа, чтобы проникать.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
УФ-лампаАналитик ЙенаUVP B-100APНаблюдение

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

AgrobacteriumGFPNicotiana benthamianasiRNA RISC

Похожие статьи