Оценка бактериального уничтожения в in vitro фагоцитами селезёнки новорождённых мышей

Аннотация

Источник: Семан, Б. Г., et.al. Неонатальная модель визуализации грамотрицательного бактериального сепсиса. J. Vis. Exp . (2020)

В этом видео демонстрируется выделение нейтрофилов и воспалительных моноцитов из селезёнки новорождённых мышей и их применение в люминесцентном бактериальном тесте на уничтожение. Он охватывает механическую диссоциацию, лизис эритроцитов, обогащение клеток на основе магнитных шариков, бактериальную инкубацию и защиту от антибиотиков. Временные показатели люминесценции указывают на первоначальную интернализацию бактерий, за которой следует иммунно-опосредованный клиренс.

Протокол

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этическому обзору животных.

1. Бактериальный анализ на уничтожение бактерий in vitro

1. Удалите селезёнку у неинфицированного новорождённого щенка и поместите её в нейлоновую корзину размером 40 мкм в стерильную чашку Петри диаметром 60 мм. Повторите это, и селезёнки собирают в одну трубку, чтобы собрать и вместе униформировать.
2. Добавьте 5 мл фосфатно-буферного физиологического раствора (PBS), дополненного 10% сывороткой для плода (FBS).
3. Дегрегировать ткань с помощью стерильного поршня для шприца объемом 3 мл до создания суспензии из одной ....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
ACK Lysis Buffer	Gibco	LSA1049201	Анализ бактериального клиренса
Микрошарики анти-Ly-6B.2	Miltenyi Biotec	130-100-781	Изоляция клеток
Escherichia coli O1:K1:H7-lux (экспрессирует люциферазу)	Н/Д	Н/Д	Построен внутри WVU
Изоляционный буфер	Miltenyi Biotec	Н/Д	Анализ бактериального клиренса
ЛБ Броут, Леннокс	Биореагенты Fisher	BP1427-500	Рост бактерий
EASYstrainer (Нейлоновая корзина)	Bio-one Грейнера	542 040	Ячейное сито
SpectraMax iD3	Молекулярные устройства	Н/Д	Считыватель пластин