$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
Визуализация инфекции с помощью биолюминесценции
- Для визуализации прогрессирования инфекции введите хромосомный биолюминесцентный оперон (luxCDABE) в протестированные штаммы Pseudomonas aeruginosa PGN5 и VE2. Плазмиды и протокол маркировки этих штаммов были разработаны в лаборатории Швейцера и могут быть несовместимы со всеми видами или штаммами бактерий. Важно, что визуализация инфекции является необязательной; Таким образом, геномная вставка этого оперона не требуется для проведения исследования смертности.
- Подготовьте и проверяйте сорта. Кроме того, проверяйте биолюминесценцию в маркированных штаммах на каждом этапе валидации.
- После подготовки сортов вводите животным группами по 10 биолюминесцентных штамм, следуя указанным выше шагам.
- Снимайте животных каждые 3 часа в течение 24 часов с помощью системы визуализации, способной к биолюминесценции.
- Сначала подготовьте имиджер, установив параметры камеры и нагрев сцену для животных. Затем установите поток кислорода на 1,5 л в минуту (или следуйте рекомендациям производителя).
- После стабилизации имиджера и стадии сразу после инъекции поместите одну мышь в анестезиологическую камеру и введите в камеру 3,5% изофлуран с потокомO2 примерно на 4 минуты. Методы анестезии могут различаться в зависимости от камеры и/или используемого анестетика; Следуйте рекомендациям производителя. Определите правильную анестезию с помощью теста на отмену.
- Переместите мышь на уровень стабилизации температуры. Положите мышь на спину с вытянутыми руками и установите носовой конус для введения 2,5% изофлурана на протяжении всей процедуры.
- Закройте дверь и сделайте биолюминесцентные снимки и рентгеновские снимки мыши.
- Когда съёмка завершена, верните мышь в клетку и следите за ней. Мышь должна прийти в сознание в течение 3-5 минут.
- Продолжайте снимать мышей каждые 3 часа в течение 24 часов, каждый раз используя разные мыши из каждой группы. Не повторяйте изображение мыши в течение 24 часов из-за возможных побочных эффектов при повторном воздействии анестезии. Одна мышь должна получать только одну дозу анестезии каждые 24-36 часов. Очищайте платформу для обработки изображений после того, как каждая мышь будет выполнена. Выключите имиджер между точками времени съёмки.
ПРИМЕЧАНИЕ: Биолюминесценция исчезает, независимо от введённого штамма. Интенсивность и продолжительность биолюминесценции варьируются в зависимости от множества факторов, включая количество введённых бактерий, мышиный штамм, бактериальный штамм и т.д.