Подготовка ткани мышиного мочевого пузыря для визуализации бактериальной инфекции

Abstract

Источник: O'Brien, V. P. и др., Рецидивирующая инфекция мочевыводящих путей Escherichia coli, вызванная воздействием мочевого пузыря Gardnerella vaginalis у мышей. J. Vis. Exp. (2020)

В этом видео демонстрируется использование сканирующей электронной микроскопии для визуализации колонизации бактерий и взаимодействия хозяина с патогеном в эпителии мочевого пузыря в модели мышей до инфицирования.

Protocol

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Визуализация мочевого пузыря с помощью сканирующей электронной микроскопии

   ПРИМЕЧАНИЕ: Эту процедуру можно провести в любой момент времени, когда требуется визуализация уротелия. Как показано на рисунке 1 (фиолетовые квадраты), уропатогенные взаимодействия E. coli (UPEC) и уротелиального организма лучше всего визуализировать между 6 чами и 24 часами после инокуляции UPEC во время формирования резервуара, а уротелиальная эксфолиация, вызванная Gardnerella vagina....

Results

Рисунок 1. Схема модели мыши. Временная шкала выделена для отражения этапов или процедур модели, описанной в протоколе. Фаза 1 (оранжевый): Создание внутриклеточных уропатогенных резервуаров E. coli (UPEC). Мыши трансуретрально инъеки.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Иглы размером 30G x 1/2	BD	305106	Для катетеров
5 1/2" прямой щипца гемостат	МакКессон	487377	Фиксация мочевого пузыря in situ
ACE 600 Sputter coater	Leica		Обработка выборок SEM
Заготовка алюминиевого SEM	Тед Пелла	16111	Обработка выборок SEM
Хлорид кальция	EMS	12340	Фиксация мочевого пузыря in situ
Проводящая углеродная клеевая вкладка	Тед Пелла	16084-1	Обработка выборок SEM
Проводящая серебряная краска	Тед Пелла	16034	Обработка выборок SEM
Критическая сушилка CPD 300	Leica		Обработка выборок SEM
Металлический клипс цитоворонки	Симпорт	M964B	цитоспан анализы мочи
Этанол	EMS	15050	Обработка выборок SEM
Глюкоза	Sigma	G7528	Для среды роста G. vaginalis NYCIII
Глутаральдегид	EMS	16320	Фиксация мочевого пузыря in situ
Набор для окраски Hema 3	Фишер	23123869	Цитоспрутованный анализ мочи
HEPES	Cellgro	25-060-CL	Для среды роста G. vaginalis NYCIII
Иридий	Тед Пелла	91120	Обработка выборок SEM
Merlin FE-SEM	Zeiss		Сканирующий электронный микроскоп
Очиститель воды Milli-Q	Миллипор	IQ-7000	Обработка выборок SEM
Тетроксид осмия	EMS	19170	Обработка выборок SEM
Параформальдегид	EMS	15710	Фиксация мочевого пузыря in situ
Полиэтиленовые трубки	Интрамедик	427401	для катетеров
Протеозный пептон #3	Фишер	DF-122-17-4	Для среды роста G. vaginalis NYCIII
Двулезовое лезвие бритвы с покрытием PTFE	EMS	72000	Нарезка мочевого пузыря для СЭМ