Подготовка гемолитической культуры Staphylococcus aureus для исследований взаимодействия хозяина и патогена

Аннотация

Источник: Behera, R.K. и др., Метод на основе флуоресценции для изучения регуляции бактериальных генов в инфицированных тканях. J. Vis. Exp . (2019)

В этом видео демонстрируется подготовка гемолитических культур Staphylococcus aureus для стандартизации роста бактерий и достижения метаболической синхронизации для исследований взаимодействия хозяина и патогена.

Протокол

1. Подготовка бактериального инокулюма
   1. Streak Staphylococcus aureus представляют интерес для выделения на кровяных агарных пластинах из замороженного глицеролового запаса. Инкубировать при 37 °C в течение 16–24 часов, чтобы подтвердить гемолитические фенотипы на основе их способности к лизеризации эритроцитов (эритроцитов) и формированию прозрачных зон.
   2. Начните ночные культуры, инокуляцируя отдельные колонии каждого сорта до 4 мл триптического соевого бульона (TSB) в стерильных стеклянных трубках. Вращайте трубки при 37 °C в течение 16–24 часа в трубочном ролике, установленном примерно под углом 70° и 70 оборотов в минуту (RPM).
   3. Используйте спектрофотометр для измерения оптической плотности на 600 нм (_{OD 600}) культур с шага 2.1.2. Используйте стерильную среду в качестве оптического ориентира (бланк). Разведите эти клетки до_{OD 600} с объёмом 0,05 в 25 мл стерильного триптического соевого бульона (TSB) в отдельных колбах по 125 мл DeLong (соотношение колбы к объёму 5:1) и инкубировать культуры в водяной бане (для правильной передачи тепла культурам), встряхивая при 280 об/мин и устанавливая температуру 37 °C.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Рост инокуля может осуществляться разными способами; Представлен один из методов роста клеток до экспоненциальной фазы. В любом случае важно постоянно использовать один и тот же метод подготовки клеток к прививке.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
5% овечьей крови	Hardy Diagnostics (Санта-Мария, Калифорния)	A10
Орбитальная трясущаяся водяная баня	Нью-Брансуик Иннова	NA
Триптический соевый бульон	VWR	90000-376
УФ-видимый спектрофотометр	Beckman Coulter-DU350	NA