Подготовка гемолитической культуры Staphylococcus aureus для исследований взаимодействия хозяина и патогена

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Behera, R.K. и др., Метод на основе флуоресценции для изучения регуляции бактериальных генов в инфицированных тканях. J. Vis. Exp . (2019)

В этом видео демонстрируется подготовка гемолитических культур Staphylococcus aureus для стандартизации роста бактерий и достижения метаболической синхронизации для исследований взаимодействия хозяина и патогена.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Подготовка бактериального инокулюма
1. Streak Staphylococcus aureus представляют интерес для выделения на кровяных агарных пластинах из замороженного глицеролового запаса. Инкубировать при 37 °C в течение 16–24 часов, чтобы подтвердить гемолитические фенотипы на основе их способности к лизеризации эритроцитов (эритроцитов) и формированию прозрачных зон.
2. Начните ночные культуры, инокуляцируя отдельные колонии каждого сорта до 4 мл триптического соевого бульона (TSB) в стерильных стеклянных трубках. Вращайте трубки при 37 °C в течение 16–24 часа в трубочном ролике, установленном примерно под углом 70° и 70 оборотов в минуту (RPM).
3. Используйте спектрофотометр для измерения оптической плотности на 600 нм (_{OD 600}) культур с шага 2.1.2. Используйте стерильную среду в качестве оптического ориентира (бланк). Разведите эти клетки до_{OD 600} с объёмом 0,05 в 25 мл стерильного триптического соевого бульона (TSB) в отдельных колбах по 125 мл DeLong (соотношение колбы к объёму 5:1) и инкубировать культуры в водяной бане (для правильной передачи тепла культурам), встряхивая при 280 об/мин и устанавливая температуру 37 °C.
  ПРИМЕЧАНИЕ: Рост инокуля может осуществляться разными способами; Представлен один из методов роста клеток до экспоненциальной фазы. В любом случае важно постоянно использовать один и тот же метод подготовки клеток к прививке.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя

Компания

Каталожный номер

Комментарии

5% овечьей крови

Hardy Diagnostics (Санта-Мария, Калифорния)

A10

Орбитальная трясущаяся водяная баня

Нью-Брансуик Иннова

Триптический соевый бульон

VWR

90000-376

УФ-видимый спектрофотометр

Beckman Coulter-DU350

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение