Живое изображение взаимодействий хозяина и патогена в эмбрионах данио-рерио, инфицированных Mycobacterium abscessus

Аннотация

Источник: Bernut , A. и др. Расшифровка и визуализация патогенеза и связки Mycobacterium abscessus в эмбрионах данио-рерио. J. Vis. Exp . (2015)

В этом видео демонстрируется протокол, использующий трансгенные эмбрионы данио-рерио, экспрессирующие флуоресцентные макрофаги и инфицированные грубым штаммом Mycobacterium abscessus , для визуализации взаимодействий хозяина и патогена. Она показывает, как внеклеточная связь способствует избеганию иммунитета, способствуя выживанию бактерий и повреждению клеток хозяина.

Протокол

1. Живое изображение инфекции M. abscessus

1. Анестезированные эмбрионы Маунт Трикаин в 1% с температурой плавления агарозы в чашке Петри диаметром 35 мм перед эпифлуоресцентными микроскопическими наблюдениями. Используйте стеклянную чашу для инвертированной конфокальной микроскопии или слайд с однополостью для вертикальной конфокальной микроскопии. Направить эмбрион в нужное положение и покрыть затвердевшую агарозу водой с трикаином.
2. Используйте эпифлуоресцентный микроскоп с объективом 10 X для последовательного получения и передачи изображений всего эмбриона. В качестве альтернативы используйте конфокальный микроскоп с объективами 40X или 63X для визуализации активности иммунных клеток после инфекции.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Агароза с низким плавлением	Сигма-Олдрич
Этил3-аминобензоатная метанесульфонатная соль (трикаин)	Сигма-Олдрич	A5040