В этом видео демонстрируется использование тонкослойной хроматографии (TLC) для оценки деградации экзополисахаридов (EPS) человеческой фекальной микробиотой. Фрагменты EPS в ферментационных супернатантах разделяются по размеру и полярности с помощью TLC, а затем визуализируются в виде цветных полос после окрашивания, специфичного для углеводов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Проведение тонкослойной хроматографии для оценки деградации бактериальных экзополисахаридов
221 просмотров
⸱
31 марта 2026 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
1. Деградация экзополисахаридов (EPS) человеческой фекальной микробиотой
- Загрузите 0,2 мкл ферментированных супернатантов на алюминиевые пластины с тонкослойной хроматографией с предварительно покрытым кремним гелем 60 (TLC), затем высушите с помощью фена.
- Проявляйте пластины в 20 мл раствора муравьиной кислоты/н-бутанола/воды (6:4:1, v:v:v) и сушите с помощью фена.
- Замочите тарелки в реагенте орцинола для покраски, затем высушите с помощью фена.
- Подготовьте реагенты орцинола, растворив 900 мг лихенола в 25 мл дистиллированной воды, затем добавив 375 мл этанола. В результате необходимо медленно добавлять концентрированную серную кислоту и тщательно перемешивать раствор.
- Нагрейте тарелки при 120 °C в печи для выпечки 3 минуты и оцените деградацию EPS, измеряя диапазоны TLC.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Духовка для выпечки | Шанхайская Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | Используйте для нагрева и выпечки |
| Этанол | Сигма-Олдрич | E7023 | Используйте для приготовления витамина K1 |
| Муравьиная кислота | Сигма-Олдрич | 399388 | Используется для TLC |
| Лихенол | Solarbio | C8380 | Используйте для подготовки цветной пластины |
| n-Бутанол | ChemSpider | 71-36-3 | Используется для TLC |
| Орцинол | Сигма-Олдрич | 447420 | Используется для приготовления орциноловых реагентов |
| Серная кислота | Сигма-Олдрич | 150692 | Используется для приготовления орциноловых реагентов |
| Алюминиевые листы TLC | МеркМиллипор | 116835 | Используется для TLC |
