Проведение тонкослойной хроматографии для оценки деградации бактериальных экзополисахаридов

Аннотация

Источник: Ху, Й. и др. Анализ взаимодействий между эндобиотиками и микробиотой кишечника человека с использованием систем ферментации в ваннах in vitro. J. Vis. Exp . (2019)

В этом видео демонстрируется использование тонкослойной хроматографии (TLC) для оценки деградации экзополисахаридов (EPS) человеческой фекальной микробиотой. Фрагменты EPS в ферментационных супернатантах разделяются по размеру и полярности с помощью TLC, а затем визуализируются в виде цветных полос после окрашивания, специфичного для углеводов.

Протокол

1. Деградация экзополисахаридов (EPS) человеческой фекальной микробиотой

1. Загрузите 0,2 мкл ферментированных супернатантов на алюминиевые пластины с тонкослойной хроматографией с предварительно покрытым кремним гелем 60 (TLC), затем высушите с помощью фена.
2. Проявляйте пластины в 20 мл раствора муравьиной кислоты/н-бутанола/воды (6:4:1, v:v:v) и сушите с помощью фена.
3. Замочите тарелки в реагенте орцинола для покраски, затем высушите с помощью фена.
   1. Подготовьте реагенты орцинола, растворив 900 мг лихенола в 25 мл дистиллированной воды, затем добавив 375 мл этанола. В результате необходимо медленно добавлять концентрированную серную кислоту и тщательно перемешивать раствор.
4. Нагрейте тарелки при 120 °C в печи для выпечки 3 минуты и оцените деградацию EPS, измеряя диапазоны TLC.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Духовка для выпечки	Шанхайская Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd	DHG-9240A	Используйте для нагрева и выпечки
Этанол	Сигма-Олдрич	E7023	Используйте для приготовления витамина K1
Муравьиная кислота	Сигма-Олдрич	399388	Используется для TLC
Лихенол	Solarbio	C8380	Используйте для подготовки цветной пластины
n-Бутанол	ChemSpider	71-36-3	Используется для TLC
Орцинол	Сигма-Олдрич	447420	Используется для приготовления орциноловых реагентов
Серная кислота	Сигма-Олдрич	150692	Используется для приготовления орциноловых реагентов
Алюминиевые листы TLC	МеркМиллипор	116835	Используется для TLC