Изучение микробной активности кишечника человека на экзополисахаридах

Аннотация

Источник: Hu, Y. et.al., Анализ взаимодействий между эндобиотиками и микробиотой кишечника человека с использованием систем ферментации в ваннах in vitro. J. Vis. Exp .(2019)

В этом видео демонстрируется анализ образования короткоцепочечных жирных кислот микробиотой кишечника человека в ответ на экзополисахариды. Это подчёркивает разделение и количественное определение продуктов микробной ферментации с помощью газовой хроматографии. Результаты показывают, что экзополисахариды модулируют микробные метаболиты, влияющие на динамику хозяина и патогена в кишечнике.

Протокол

1. Влияние экзополисахарида (EPS) на производство короткоцепных жирных кислот (SCFA) микробиотой кишечника человека
   1. Добавьте ферментированные супернатанты (1 мл), приготовленные по шагам в центрифугные трубки объемом 5,3–2 мл.
   2. Добавьте 0,2 мл 25% метафосфорной кислоты в каждый образец и тщательно перемешайте растворы с помощью вихря.
   3. Центрифугуйте смеси при 13 000 x g на 20 минут и перенесите супернатанты в свежие трубки.
   4. Одновременно готовят растворы уксусной, пропионовой, бутировой кислоты, изобутировой, валериновой и изовалереновой кислот с концентрацией 120 мм. Затем добавьте по 1 мл каждой приготовленной кислоты к 1,2 мл 25% (с в/в) метафосфорной кислотой и используйте как стандартные коктейли.
   5. Фильтруйте образцы с помощью мембраны диаметром 0,22 мкм.
   6. Обнаружение концентраций SCFA с помощью высокоэффективной газовой хроматографии.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Колонка InertCap FFAP (0,25 мМ x 30 м x 0,25 мкм) используется для газовой хроматографии (ГК). Концентрации SCFA затем количественно определяются на основе пиковых зон с помощью метода одноточкового внутреннего стандарта в программном пакете GC Solution.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Мембранные фильтры с размером 0,22 мкм	Миллипор	SLGP033RB	Использование для фильтрации образцов
Решето 0,4 мм	Термо Фишер	308080-99-1	Использование для приготовления образцов человеческих фекалий
Уксус	Сигма-Олдрич	71251	Стандартный образец для SCFA
Бутирик	Сигма-Олдрич	19215	Стандартный образец для SCFA
Капиллярная колонна	SHIMADZU-GL	InertCap FFAP (0,25 мм × 30 м × 0,25 мкм)	Используется для обнаружения SCFA
Газовая хроматография	Корпорация Шимадзу	GC-2010 Plus	Используется для обнаружения SCFA
Изобутирные	Сигма-Олдрич	46935-U	Стандартный образец для SCFA
Изовалеровые кислоты	Сигма-Олдрич	129542	Стандартный образец для SCFA
Метафосфорная кислота	Сигма-Олдрич	B7350	Стандартный образец для SCFA
Нет,	Сигма-Олдрич	30620	Базовое решение, используемое для регулировки pH буферов
Пропионик	Сигма-Олдрич	94425	Стандартный образец для SCFA
Валерик	Сигма-Олдрич	75054	Стандартный образец для SCFA