Таймлапс-визуализация сегрегации хромосом у флуоресцентно маркированных бактерий

Аннотация

Источник: Шумахер, Д., и Согаард-Андерсен, Л. Флуоресцентное живоклеточное изображение полного вегетативного клеточного цикла медленнорастущей социальной бактерии Myxococcus xanthus. J. Vis. Exp. (2018)

В этом видео демонстрируется использование живых клеток для отслеживания происхождения флуоресцентно помеченных хромосом во время деления бактериальных клеток. Он фиксирует динамику сегрегации хромосом с помощью таймлапс-фазового контраста и флуоресцентной микроскопии.

Протокол

1. Установка микроскопа и таймлапс-обработка

ПРИМЕЧАНИЕ: Описанный здесь протокол был разработан для инвертированного широкопольного микроскопа с автофокусом, масляным объективом PH3 100X/1,30 NA, моторизованной ступенью X, Y, камерой sCMOS, источником света, фильтрами для белоков зелёного флуоресцентного, красно-флуоресцентного или жёлтого флуоресцентного белка, а также инкубационной камеры с контролируемой температурой. Эта камера защищает клетки от света и при постоянной температуре.

1. Перед началом микроскопии нагрейте инкубационную камеру и микроскоп до 32 °C в течение ~1–2 часа.
   ПРИМЕЧАНИЕ: В зависимости от устан....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
DMI6000B с AFC	Микросистемы Leica	11888945	Автоматический инвертированный широкопольный флуоресцентный микроскоп с адаптивным управлением фокусировки
Универсальная монтажная рама	Микросистемы Leica	11532338	Держатель для сцены для разных размеров выборок
HCX PL FLUOTAR 100x/1.30 oil PH3	Микросистемы Leica	11506197	Объектив фазового контраста
Камера Orca Flash 4.0	Хамамацу	11532952	4,0-мегапиксельная sCMOS-камера для захвата изображений
Набор фильтров TXR ET, k	Микросистемы Leica	11504170	Набор флуоресцентных фильтров, Пример: 560/40 Эм: 645/75
Набор фильтров L5 ET, k	Микросистемы Leica	11504166	Набор флуоресцентного фильтра, Пример: 480/40 Эм: 527/30
Набор фильтров YFP ET, k	Микросистемы Leica	11504165	Набор флуоресцентных фильтров, Например: 500/20 Эм: 535/30
ProScan III	Приор	H117N1, V31XYZEF, PS3J100	Контроллер автоматизации микроскопа с интерактивным центром управления
Источник света EL 6000	Микросистемы Leica	11504115	Внешний источник флуоресцентного света
Incubator BLX Black	Пекон	11532830	Чёрная инкубационная камера вокруг микроскопа
Контроль температуры 37-2 цифровой	Микросистемы Leica	11521719	Автоматический контроль температуры для инкубационной камеры
Фильтр Filtropur BT25 с крышкой бутылки 0.2	Сарштедт	831,822,101	Фильтр на крышке бутылки для стерилизации буферов
Deckgläser	VWR	630-1592	Стеклянная крышка (60 x 22 мм, толщина: 0,7 мм)
Seakem LE agarose	Лонза	50004	Агароза для микроскопических слайдов
Leica Metamorph AF	Микросистемы Leica	11640901	Программное обеспечение для управления микроскопом и для анализа изображений
Tetraspeck Microsperes, 0,5 мкм	ThermoFisher	T7281	Флуоресцентные микросферы