Визуализация распределения бактериального белка в трёх измерениях с помощью флуоресцентной визуализации

Аннотация

Источник: Bratton, B. P. и др., Трёхмерная визуализация бактериальных клеток для точного представления клеток и точной локализации белка. J. Vis. Exp .(2019)

В этом видео демонстрируется метод получения и анализа трёхмерных флуоресцентных изображений бактериальных клеток для изучения организации белков на уровне одной клетки.

Протокол

1. Визуализация

1. Вставьте герметичный стекло на микроскоп и дайте ему постоять 5 минут, чтобы уравновесить температуру с окружающей средой. Комната микроскопа может находиться при другой температуре, чем комната для подготовки образцов.
2. Возьмите флуоресцентный z-стек образца образца.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Z-стек должен полностью покрывать образец с интервалом z, меньше глубины резкости. Для объектива 1,45 NA 100x и клетки E . coli толщиной ~1 мкм хорошо работают 40 шагов при 100 нм на шаг. Для больших клеток или клеток, которые не лежат идеально ровно на поверхности, может потребоваться 50 и более шагов. Включите достаточно шагов и убе....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Агарозе	sigma-Aldrich	A9539
Ватная палочка	Puritan Medical Products Company LLC	S304659	Использовал VaLaP
Обложные слипы	VWR	16004-302
Фиджи	ImageJ	https://fiji.sc	Используется для CRO-ячейки
Lanolin	Сигма-Олдрич	L7387	Соединяйте с парафином и вазелином для получения VaLaP
Среда роста LB	BD Difco	DF0446173
M63 medium	Биологическая служба США	M1015
MATLAB	Mathworks		Нужно было запустить вперёд скрипты свертки
Микроскопические стекли	Фишер	12-550-133
Элементы NIS	Нкон
Парафин	Сигма-Олдрич	327212
Вазелин	Эквивалент	49035-038-27
Сцена Piezo z	Nikon	77011589
Наконечники пипеты -p200	USA Scientific	1111-0730
Наконечники пипеты — p10	USA Scientific	1111-3730