Методическая статья

Количественное определение кишечной бактериальной нагрузки у данио-рерио, инфицированных холерой Vibrio

26 февраля 2026 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Наг, Д. и др. Количественная оценка колонизации и диареи Vibrio cholerae в модели взрослой данио-рерио. J. Vis. Exp . (2018)

В этом видео демонстрируется протокол количественной оценки кишечной бактериальной нагрузки у взрослых данио-рерио, инфицированных антибиотикорезистентным штаммом Vibrio cholerae. После эвтаназии и вскрытия кишечник изолируется, гомогенизируется стеклянными бусинами и обрабатывается для высвобождения бактерий. Полученный гомогенат наносится на селективную среду, а синие колонии, экспрессирующие β-галактозидазу, подсчитываются для оценки бактериальной нагрузки.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Определение уровней колонизации кишечника

ПРИМЕЧАНИЕ: Колонизация кишечника — самая полезная метрика в модели данио-рерио, так как её можно использовать для сравнения относительной приспособленности различных штаммов V. cholerae или влияния мутаций или нокаутов генов.

1. Эвтаназия

1. Когда эксперимент достигнет желаемой цели, возьмите образец воды инфекции (обычно достаточно 15 мл), чтобы учесть количество выделяемых бактерий и измерять диарею (например, анализ на муцин, содержание белка и/или передозирование), если это необходимо.

2. ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Инструмент   
Шейкер-инкубаторNew Brunswick Scientific, Эдисон, Нью-ДжерсиExcella E25 
ИнкубаторNUAIRE, Плимут, МиннесотаAuto Flow 
СпектрофотометрТермо, Уолтем, МассачусетсGeaesys 6 
Вихревой гомогенизаторMinibeadbeater24112011 
Весовая машинаОхаус, Колумбия, МэрилендAdventurer Pro 
Мешалка для нагреваКорнинг, Корнинг, Нью-ЙоркPC-420D 
Горелка   
Автоматический счётчик колонийREVSCI120417B 
Материалы   
Стеклянные стаканы по 400 млПирекс  
Перфорированные крышкиДержатель для микронаконечника с отверстиями от коробки  
Одноразовые пластиковые ложкиOffice Depot, Бока-Ратон, ФлоридаD15-25-7008 
Система аквариумовAquaneering, Сан-Диего, Калифорния  
Очиститель воды ROAqua FXTK001 
Рыболовная сетьМарина  
Корм для рыбТетра-плавник  
Солёные креветкиКрасный клейм джунглейO.S.I. PRO 80 
Пенопластовая плита   
Кегли   
СкальпелиFine Scientific Tools, Фостер-Сити, Калифорния10000-10 
ЩипцыFine Scientific Tools, Фостер-Сити, Калифорния11223-20 
Ножницы ВаннаFine Scientific Tools, Фостер-Сити, Калифорния15000-11 
Трубки с винтовыми крышками объемом 2 млFisher Scientific, Хэмптон, Нью-Гэмпшир02-681-375 
Стеклянные бусины толщиной 1 ммBio Spec11079110 
Стеклянные бусины для намазыванияСигма, Сент-Луис, Миссури18406-500G 
Пластина ПетриФишер Бранд, Хэмптон, Нью-ГэмпширFB0875713 
Центрифугная трубка объемом 1,5 млМидси, Вэлли-Парк, МиссуриAVSS1700 
Центрифугная трубка объемом 50 млКорнинг Фэлкон, Корнинг, Нью-Йорк352098 
ПробиркиПирекс9820 
Стеклянная пипеткаФишер Бранд, Хэмптон, Нью-Гэмпшир13675K 
МикропипеткиSartorius Biohit, Гёттинген, Германияm1000/m200/m20 
СоветыGenesee Scientific, Сан-Диего, Калифорния24-150RS/24-412 
Химикаты   
Instant Ocean соли   
Фосфатный буферный физиологический растворVWR Life Science, Раднор, ПенсильванияK813-500 мл 
Трикаин (этил3-аминобензоатная метансульфонатная сольСигма, Сент-Луис, МиссуриA5040 
LB средний материал   
NaClFisher Scientific, Хэмптон, Нью-ГэмпширBP358-212 
АгарBD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния214010 
TCBS AgarBD Biosciences, Сан-Хосе, Калифорния265020 
DCLS AgarСигма, Сент-Луис, Миссури70135-500 г 
Программное обеспечение   
Microsoft Office   
Призма 5   

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Danio rerioX gal

Похожие статьи