В этом видео демонстрируется приготовление сферопластов из палочкообразных, грамотрицательных бактерий. Бактерии выращиваются в присутствии антибиотика для образования удлинённых нитей. Их промывают гипертоническим раствором и обрабатывают буфером для удаления внешней клеточной стенки. Гипотоническое лечение образует сферопласты, которые стабилизируются охлаждённым изотоническим раствором и хранятся в холодных условиях.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Образование сферопластов из грамотрицательных бактерий
323 просмотров
⸱
26 февраля 2026 г.
В этой статье
Аннотация
Протокол
1. Подготовка раствора
ПРИМЕЧАНИЕ: Подготовьте растворы, описанные в шагах 1.1–1.9, чтобы получить сферопласты Escherichia coli (E. coli )
- Приготовьте 1 M трис(гидроксиметил)аминометан гидрохлорида (Tris-Cl) с pH 7,8, растворив 10,34 г Tris·HCl и 4,17 г трис(гидроксиметил)аминометана (Tris·OH) в 50 мл дистиллированной воды (dH₂O) в колбу объемом 125 мл. Стерилизуйте, фильтруя через шприцовый фильтр диаметром 25 мм с мембраной 0,2 мкм и храните в конической трубке при комнатной температуре.
- Приготовьте раствор A (20 мМ хлорида магния (MgCl₂), 0,7 млн сахарозы, 10 мМ Tris-Cl, pH 7,8), растворив 0,10 г MgCl₂ (95,2 г/мол....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Рисунок 1: Репрезентативные изображения Escherichia coli. (A) бактерий E. coli , ( B) E . coli и ( C) E . coli spheroplast. Изображения были сделаны при увеличении 100 раз.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Тризма-гидрохлорид (Tris HCl) | Sigma | T3253 | |
| База Тризмы (Трис, Огайо) | Sigma | T1503 | |
| Хлорид магния | Sigma | M8266 | |
| Сахароза | Sigma | S7903 | |
| Лизоцим | Sigma | L6876 | |
| Дезоксирибонуклеаза I | Sigma | D4527 | |
| Этилендиаминтетрауксусная кислота | Sigma | 106361 | Использовал Sigma 106361 при разработке оригинального протокола; 106361 был снят с производства с ED2SS в качестве замены |
| Цефалексин гидрат | Sigma | C4895 | |
| BBL Trypticase соевый бульон | Fisher Scientific | B11768 | |
| Малеиновая кислота | Sigma | M0375 | |
| Шприцовый фильтр Acrodisc 25 мм с мембраной HT Tuffryn 0,2 мкм | Корпорация Палл | 4192 |
Теги
