Количественная оценка подавления биопленки, вызванной ферментами, у патогенных бактерий

Аннотация

Источник: Tay, S. B. и др. Антивирулентное нарушение патогенных биопленок с использованием инженерных лактоназ, погасящих кворум. J. Vis. Exp . (2016)

В видео демонстрируется метод количественной оценки биопленки в патогенной бактерии, сравнивая необработанные контрольные группы с образцами, обработанными ферментом, утискающим кворум. Фермент нарушает бактериальную сигнализацию во время ранней инкубации, снижая клеточную адгезию. После промывки и дальнейшей инкубации контрольные скважины образуют плотные биопленки, тогда как обработанные скважины демонстрируют снижение образования. Для окрашивания биопленки используется катионный краситель, а для оценки биомассы измеряется поглощение.

Протокол

1. Кристаллическая фиолетовая количественная оценка образования биопленки у A. baumannii S1

1. Выращивайте культуру Acinetobacter baumannii S1 (A. baumannii) объемом 5 мл в бульоне Лизогенез (LB) (триптон 10 г/л, экстракт дрожжей 5 г/л) при 30 °C в встряхивающем инкубаторе (220 об/мин) в течение 16 часов.
2. Скорректируйте культуру A. baumannii S1 до желаемой оптической плотности при 600 нм (OD₆₀₀) 0,8. Используя пластину на 96 лунок, инокулируйте бактериальную культуру (разбавление 1:100) в свежий LB, содержащий 10 мкл очищенного фермента GKL (40 мг/мл); Последний объём новой культуры — 100 мкл.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Триптон	BD	211705
Дрожжевый экстракт	BD	212750
96-колодцевая пластина	Costar	3596
Кристал Фиолетовая	Сигма-Олдрич	C6158
Уксусная кислота	Лабораторное сканирование	PLA00654X	Предупреждение: Горючий
Synergy HT Microplate Reader	BioTek