Подготовка бактериальной культуры почвы для инфекции бактериофагами

Аннотация

Источник: Кросс, Т. и др., Оптимизированная техника обогащения для выделения видов бактериофагов Arthrobacter из изолированных образцов почвы. J. Vis. Exp.(2015)

В этом видео демонстрируется подготовка бактериальной культуры для производства бактериофагов. Он охватывает этапы инокуляции почвенной бактерии в запутанную колбу, способствуя равномерному росту через аэрацию и встряхивание, а также мониторинг плотности клеток с помощью оптических измерений плотности. Когда культура достигает оптимальной стадии роста, она готова к эффективному производству бактериофагов.

Протокол

Подготовка клеток артробактеров для выделения фагов

• Культура Arthrobacter sp .Колонии KY3901 проходили по агарной плите Luria Bertani (LB), инкубировавшейся при 30 °C в течение 2-3 дней. Выберите колонию и используйте стерильную петлю, чтобы добавить её в 250 мл бульона LB в термокультурной колбе и инкубировать в встряхивающем инкубаторе при 225 об/мин при 30 °C.
• Дайте примерно 24 часа роста для получения клеток поздней экспоненциальной или ранней стационарной фазы для экспериментов с фагной инфекцией. Внимательно следите за состоянием роста бактерий, чтобы предотвратить переход клеток в средний и поздний стационарный рост.
  ПРИМЕЧАНИЕ: Рост клеток должен состоять из оптической плотности OD₆₀₀ от 0,5 до 0,0,7 для процедур/этапов выделения и очистки фагов.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Порошок LB Broth	Фишер	BP9722-2
Гранулированный агар	Фишер	BP1423-2
Трубы Эппендорфа	Фишер	05-408-129
Пипетки по 5 мл индивидуальные	Фишер	13-678-11D
Конические трубки объемом 50 мл	Фишер	76002844
Конические трубки объемом 15 мл	Фишер	76002845
Пипетки по 10 мл индивидуально	Фишер	13-676-10J
Пипетки по 25 мл индивидуальные	Фишер	13-676-10K