Инфекция мочевыводящих путей, ассоциированная с катетером, в модели мышей

Аннотация

Источник: Conover, M. S. и др., J. Установление и характеристика ИМП и CAUTI в мышиной модели. J. Vis. Exp .(2015)

В этом видео демонстрируется процедура сборки и имплантации трансуретрального катетера у самки мыши, затем бактериальной инокуляции для установления инфекции мочевыводящих путей, ассоциированных с катетером, и изучения взаимодействий хозяина и патогена, опосредованных через биопленку.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными моделями, были рассмотрены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.

1. Модельный протокол CAUTI (инфекция мочевыводящих путей, ассоциированная с катетером), подготовка иглы катетера для модели CAUTI

1. Снимите крышку иглы на 30 G. Вырежьте 7 мм трубок PE10 (полиэтилен 10) и 5 мм силиконовой трубки, например RenaSIL. Продевайте иглу трубкой PE10, пока трубка не коснётся основания иглы.
2. Затем введите кусочек 5 мм на иглу с PE10. УФ (ультрафиолет) стерилизуйте иглы на ночь.
   ПРИМЕЧАНИЕ: При загрузке силиконовой трубки оставляйте примерно 1 мм трубки, выходящей за кончик иглы.

2. Подготовка бактериального инокулума E. faecalis OG1RF

1. Готовьте инокулюм OG1RF за 48 часов до дня прививки. Поставьте OG1RF на пластину BHI (инфузия мозга сердца) из замороженного бульона.
2. Выберите колонию, инокулируйте её в 10 мл BHI и выращивайте статически 18 часов при 37 °C. Центрифугуйте культуру и промывайте гранулы (3 раза) в объемах 1 мл стерильного 1x PBS.
3. Суспендировать бактериальную гранулу в 1x PBS (фосфатно-буферный физиологический раствор). Измеряйте оптическую плотность бактерий и регулируйте концентрацию до желаемого размера инокуля. Стандартная концентрация используемого инокулюма составляет 10⁷; однако это может варьироваться в зависимости от дизайна исследования

3. Имплантация катетера

1. Очистите рабочую станцию 70% этанолом и накройте область впитывающей крышкой (или используйте стерильную вытяжку).
2. Прикрепите иглу-катетер к пустому шприцу объёмом 1 мл (туберкулез или туберкулин). Вырежьте квадратный кусок парапленки размером 1 дюйм и нанесите сверху хирургическую смазку (примерно размером с десять центов).
   ПРИМЕЧАНИЕ: Для осадки катетера используются две разные иглы и для инокуля, чтобы минимизировать случайную инокуляцию из-за механической обработки, необходимой для имплантации катетера. Это также обеспечивает удобство при приготовлении меньшего количества инокуляционных игл.
3. Анестезиируйте мышей C57BL/6, поместив их в стеклянную банку объемом 32 унции с чайным шариком с ватными шариками, замочёнными в 3 мл изофурана или в камере испарителя (согласно протоколу производителя), пока они не потеряют сознание, но дышат нормально (1 вдох/сек).
4. Затем положите мышь на спину на бумажное полотенце и раздвините её ноги. Накройте нос мыши носовым конусом или конической трубкой объемом 50 мл ватными шариками, содержащими небольшое количество (примерно 1–2 мл) изофлурана.
   ВНИМАНИЕ: Изофлуран — это ингаляционный анестетик. Используйте в хорошо проветриваемом помещении и минимизируйте вдыхание со стороны исследователя.
5. Аккуратно пробуй мочевой пузырь, чтобы вызвать мочеиспускание и убедиться, что мочевой пузырь опорожнен. Протри периуретральную область салфеткой с 100% этанолом.
6. Дезинфицируйте периуретральную область раствором 10% повидона-йода с помощью аппликатора на ватном наконечнике. Втирайте иглу/шприц для инокуляции, направляя вперёд, в хирургическую смазку.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Повидон-йод используется для имплантации катетера, который является более мощным асептическим раствором, чем спирт. Имплантация катетера требует большей механической обработки для установки катетера и, следовательно, имеет больший риск заражения.
7. Введите катетер в отверстие уретры. После установки используйте пинцет, чтобы подтолкнуть кусочек длиной (7 мм PE10) к мочевому пузыру, в результате чего (силиконовый катетер 5 мм) протолкнёт его в мочевой пузырь. Немедленно снимите иглу, при этом 7-мм трубка всё ещё прикреплена.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Материал для подготовки катетера и иглы:
Иглы по 30 г	BD Precision Glide	305106	30 G x 1/2 (0,3 мм x 13 мм)
Полиэтиленовая трубка PE10	BD	427400	Внутренний диаметр -0,011 дюйма (0,28 мм); Внешний диаметр — 0,024 дюйма (0,61 мм)
RenaSIL 025 платиновый силиконовый трубок	Braintree Scientific, Inc	SIL 025	внутренний диаметр — 0,012 x внешний диаметр 0,025, катушка 25 футов
Материал для инфекций:
Изофлоран – Изотезия	Дворецкий Шайн	29405	250 мл
Прозрачная стеклянная банка с прямыми сторонами	Кимбл Чейз	5413289V 21
Чайный инфузер из нержавеющей стали	Schefs-Amazon		Премиальный инфузор для рассыпного чая от Schefs — нержавеющая сталь — большая ёмкость —
Нестерильные ватные шарики	Фишербранд	22-456-880
Трубки Falcon объемом 50 мл	VWR	89039-660
Isotec 3-испаритель	Омеда	1224478
Ухо-панч	Fisher Scientific	13-812-201	(при необходимости)
Раствор бетадина	Раствор бетадина		10% местный раствор повиди-йод
Ватные палочки	Fisher Scientific	22-037-924	6 дюймов
Подгузники для стола	Фишербранд	14206 63	Впитывающие подкладки (коврики 20"X36")
Хирургическая смазка	Операция	0281-0205-36
Вскрытие ножниц	Fine Science tools, INC	14084-08
Щипцы Micro-Adson	Fine Science tools, INC	11018-12
1 мл шприц	BD	309659	Туберкулиновый скользящий кончик
Парафильм	Бемис	PM996	4 дюйма x 125 футов
Стойка Эппендорфа	Фишербранд	05-541-1
Трубы Эппендорфа	MIDSCI	AVX-T-17-C
Извлечение катетеров, мочевого пузыря и почек:
Гомогенизатор	PRO Scientific INC	Bio-Gen Pro 200
5 мл полипропиленовой трубки с круглым дном	BD	352063	для гомогенизации органов
Бумажное полотенце	Georgia-Pacific
Этанол	Pharmco-AAPER	11100020С	200 доказательств
™ Пластины Costar Clear Polystyrene с 96 скважинами	Корнинг	3788
1x солёный раствор фосфата натрия	Сигма-Олдрич	P3813
Ультразвуковой очиститель BRANSONIC 1210	Корпорация Branson Ultrasonics	1210